猪血栓烷素B2TXB2酶联免疫分析.doc

猪血栓烷素B2TXB2酶联免疫分析.doc猪血栓烷素 B2(TXB2) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T 3 ng/L -120 ng/L 使用目的: 本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中血栓烷素 B2(TXB2) 含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪血栓烷素 B2(TXB2) 水平。用纯化的猪血栓烷素 B2(TXB2) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血栓烷素 B2(TXB2) , 再与 HRP 标记的血栓烷素 B2(TXB2) 抗体结合, 形成抗体- 抗原- 酶标抗体复合物, 经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血栓烷素 B2(TXB2) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线计算样品中猪血栓烷素 B2(TXB2) 浓度。试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶8 标准品( 240 ng/L ) ×1瓶 3酶标包被板 12孔×8条9 标准品稀释液 ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂 A液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂 B液 6ml × 1/瓶 12 密封袋 1个标本要求 1 .标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20 ℃保存,但应避免反复冻融 2 .不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP )活性。操作步骤 1. 标准品的稀释: 本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 120 ng/L 5 号标准品 150 μl 的原倍标准品加入 150 μl 标准品稀释液 60 ng/L 4 号标准品 150 μl的5 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 30 ng/L 3 号标准品 150 μl的4 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 15 ng/L 2 号标准品 150 μl的3 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 ng/L 1 号标准品 150 μl的2 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 2. 加样: 分别设空白孔( 空白对照孔不加样品及酶标试剂, 其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl (样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体, 甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl ,空白孔除外。 7. 温育:操作同 3。 8. 洗涤:操作同 5。 9. 显色:每孔先加入显色剂 A50 μl ,再加入显色剂 B50 μl ,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止:每孔加终止液 50μl ,