白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血_再灌注损伤的细胞凋亡的影响.pdf

中国现代医药杂志年月第卷第期· ·
· 论著·
白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的
细胞凋亡的影响
沈敏张荣庆马恒王海昌郭文怡
【摘要】目的观察白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的细胞凋亡的影响。方法培养乳鼠心肌细胞模
拟损伤随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组采用染色法及双标记
流式细胞术检测心肌细胞凋亡底物酶解法检测活性免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞
蛋白的表达。结果预处理使得心肌细胞凋亡率由±降至± 的相对活性由
± 降至± 。预处理可使表达的光密度值由± 升至± 表达的光密度值由
± 降至± 。结论白藜芦醇预处理可通过促进抗凋亡蛋白的表达、抑制促凋亡蛋白的
表达抑制凋亡过程中关键酶的活性减少引起的心肌细胞凋亡。
【关键词】白藜芦醇心肌细胞缺血再灌注损伤细胞凋亡

’
【】





± ± ± ±
± ± ±
±

【】
白藜芦醇属于一种酚类植物抗毒大鼠乳鼠的心肌细胞建立心肌缺血再灌注
素是天然的抗氧化物和自由基廓清剂主要存在于模型探讨白藜芦醇预处理
各种红葡萄果实和红葡萄酒中。在早期的一项关对损伤的细胞凋亡的影响。
于饮食****惯与冠心病发病率的流行病学研究
材料与方法
中人们发现了一个有趣的现象即在所有发达国家
中法国人饮用红葡萄酒的平均量最大但是其冠心动物及试剂新生~ 大鼠乳鼠购于第
病发病率最低。学者将这种现象称之为“法国矛盾”四军医大学实验动物中心雌雄不拘。胎牛血清和
。这种“法国矛盾”现象的产生主高糖及低糖购自公司。细胞周期及
要得益于红葡萄酒中的白藜芦醇。本研究以培养凋亡染色试剂购
自公司检测试剂盒购自
公司。
▲年陕西省科技计划项目资助项目编号
仪器共聚焦显微镜荧光显微镜及
作者单位陕西西安第四军医大学西京医院心脏内

科沈敏、张荣庆、王海昌、郭文怡第四军医大学基础部生理数码相机为美国公司产品型流
教研室马恒
· · 中国现代医药杂志年月第卷第期
式细胞仪为美国产品。免疫组织化学法检测心肌细胞的表
方法达上述各组心肌细胞爬片以乙醇固定
新生大鼠心肌细胞培养乳鼠脱颈椎酒处理以灭活内源性过氧
精浸泡开胸摘取心脏用预冷无钙镁冲化物酶正常山羊血清封闭消除非特异性染
洗后将心脏剪成碎块用胶原酶消化色然后分别加入、一抗℃过夜
分离接种于培养皿中用差速贴壁法于孵箱冲洗后依次加入生物素化山羊抗兔
中培养。将此培养液离心再次接种于含和抗生物素生物素过氧化物酶复合物
胎牛血清和高糖中细胞密度约为液显色。切片经梯度酒精脱水二甲苯
×。取生长的心肌细胞进行实验研究。透明中性树胶封片。在显微镜倍下用
心肌细胞模型参照等方法预先医学彩***像分析所有切片均随机选择视野
用高纯度氮气饱和’液缺糖、缺钙同期每切片各选取个高倍视野各视野不重复、不重
持续时间测血气氧分压≤即为模拟叠每视野待测细胞数不少于个分别输入图像
缺血用纯氧饱和’液含糖、含钙通气持续仪每视野内随机测量个细胞胞浆染色深浅用
时间即为模拟再灌注。用低氧液置换正常平均吸光度值表示每张切片共测个细胞取其
培养液并于培养瓶中充入高纯度氮