基于磁珠分离和滚环扩增电化学发光方法在基因点突变检测中的应用.pdf

基于磁珠分离和滚环扩增电化学发光方法在基因点突变检测中的应用摘要专业名称:光学申请者:苏强导师:邢达肿瘤基因突变分析在各种遗传相关疾病早期临床诊断中发挥着越来越重要的作用,而且还被应用于抗药性早期监测。因为遗传相关疾病会存在大量的特异位点的基因突变,同一个体不同组织的基因突变位点也会有差异,因此发展一种高灵敏的,快速的,准确同时简单的基因突变检测的方法已成为科学研究的热点基因点突变分析技术大概包括两大部分:等位基因识别技术和等位基因检测技术。引物延伸技术、等位特异性杂交技术、限制性内切酶技术以及寡核苷酸连接技术等为目前常见的基因识别技术。其中酶依赖的识别技术凭借其操作简单,成本低,而且特异性高的优点而受到科学界的广泛关注。利用连接酶和恒温扩增酶介导的基因识别技术则由于其适合识别任何位点的基因型而具备实现高通量检测的潜力,成为目自菏侗鸺际醴⒄沟慕沟恪9龌防┰鲎魑R恢挚梢源罅坷┰龊酸序列的方法被广泛应用,其既可进行靶核酸扩增,又可实现信号放大扩增。在等位基因检测技术方面,比较传统的方法有变性凝胶电泳,质谱以及荧光检测技术,这些方法具有高灵敏的优点,但由于实验操作繁杂,成本高限制了他们的普电化学发光珽治龇椒ㄊ墙┠攴⒄蛊鹄的一种极高灵敏度的检测方法,它有效地将电化学方法与化学发光结合于一体,利用三联吡啶钌与三丙***在电极表面发生氧化还原反应而产生高效,稳定地发光,具有简单、快速、灵敏度高、适用性广等特点,已经广泛应用于免疫检测和话题。遍应用。中文摘要
药物分析中。实验中将高特异性滚环扩增方法与高灵敏的电化学发光检测技术结合起来,发展了一种特异而灵敏的基因点突变分析技术。本实验通过设计特异性的闭合探针、捕捉探针、信号探针,使基于酶连接反应生成环状的单链核酸序列,以此环状单链核酸序列为模板进行滚环扩增最终生成长的核酸序列,从而使大量的信号探针与之结合而提高了灵敏度。与信号探针杂交结合的滚环扩增产物通过链酶亲和素和生物素的特异性结合被分离纯后富集在电极表面直接进行电化学发光检测,分离纯化操作简单快速,而且具有富集的作用,提高了电化学发光的检测效率。该方法的检测灵敏度可以达至的水平,同时具有非常好的检测特异性。实验结果表明该方法可以作为一种灵敏度高,可靠性强的核酸突变检测方法,并且有望发展成为临床突变分析的方法。同时此方法在***离子检测中得到了扩展应用,在检测中***离子检测灵敏度达到了的水平,同时还保持了非常好的离子选择性。通过结合重会属***离子检测验证了此方法具有非常好应用延展性。这些结果说明滚环扩增和电化学发光方法的结合为各种小分子检测提供一个高效率的途径,同时也说明了此种方法具有很大应用潜能。滚环扩增,电化学发光,闭合探针,基因点突变,磁珠分离中文摘要
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.龌防┰┰龇椒ㄔ诘鞍字史治鲋械挠τ谩虻姆⑾⒐⒐獾闹饕@⒐⒐夥治龇椒ㄕ雇实验装置的主要结构单元⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...缁Х⒐夥从Σ糠帧录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.点突变检测研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯滚环扩增的分子检测技术研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯虻难芯坷芳跋肿础电化学发光的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二章实验仪器装置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验装置的介绍⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..目录
..⋯⋯⋯⋯...滚环扩增时间对电化学发光的影响⋯⋯.⋯..信号探针的量对电化学发光的影响⋯⋯⋯...磁珠的量对电化学发光的影响⋯⋯⋯⋯⋯性分析..⋯...⋯.⋯⋯..⋯⋯..⋯⋯⋯⋯....觳夥ǖ牧槊舳取子的特异性分析⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯...⋯⋯⋯....觳夤胱拥牧槊舳取第三章基于滚环扩增的电化学发光法检测基因点突变及在重金属离子检测的扩展应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.基于滚环扩增的电化学发光法检测基因点突变分析⋯..诠龌防┰龊偷缁Х⒐检测法的特异基于滚环扩增的电化学发光法检测重金属离子的扩展应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.诠龌防┰龊偷缁Х⒐检测二价***
狤检测***离子的选择性分析...⋯⋯⋯..讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第四章总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯