羟基磷灰石的使用方法.doc

羟基磷灰石填料
——纯化蛋白、多肽、核酸
分离机理：羟基磷灰石具有独特的分离机理，是唯一直接用于蛋白质和核酸纯化的无
机层析填料，高度耐碱，生物安全性最高。其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子
键结合，具有离子交换特性
羟基磷灰石填料
——纯化蛋白、多肽、核酸
分离机理：羟基磷灰石具有独特的分离机理，是唯一直接用于蛋白质和核酸纯化的无
机层析填料，高度耐碱，生物安全性最高。其中磷酸离子与带正电的蛋白质以离子
键结合，具有离子交换特性，可由NaCl浓度梯度或磷酸钠浓度梯度洗脱，其中的Ca2＋离子与带负电蛋白质的自由羧基以
金属螯合方式结合，该结合方式对NaCl不敏感，可由磷酸钠浓度梯度洗脱。因此该填料既可以用磷酸钠单梯度洗脱，也可以采用NaCl梯度洗脱后以低浓度磷酸钠缓冲液平衡，再以磷酸钠浓度梯度洗脱的双梯度洗脱模型，以达到更高的分辨率。羟基磷灰石类型选择：羟基磷灰石因陶瓷
化工艺不同分为2种类型：I型和II型，I
型对蛋白质具有更大的保留，对普通蛋白
质具有更大的动态载量，主要纯化大部分
蛋白质（分子量一般在100kd一下）；II
型由于孔径较I型大，因而对抗体和部分
重组疫苗等大分子量蛋白质的动态载量
更高，而对HSA几乎无保留，因而更适合于抗体的纯化，同时II型对核酸具有更大的保留，能够分辩单、双链、超螺旋等各种高级结构的DNA，因而也适合纯化核酸。
●高动态载量、高流速、高产率●更好的化学稳定性和机械强度，更长的寿命
●刚性结构，保证了其在PH>的范围内使用，可用NaOH清洗●良好的批次重现性，容易放大化●可随意选用阳离子和金属螯合两个模
式分离纯化蛋白或其他分子
●能用于层析系统、重力流柱、AcroPrep
多孔板等
应用
●碱性蛋白的纯化（免疫球蛋白）
●抗体纯化
●酸性蛋白（白蛋白）
●去除DNA和内***
●纯化磷多肽
●分离纯化复杂的蛋白混合物
●纯化质粒
流动相：平衡液：5mM的磷酸钠缓冲液，PH=洗脱液：的磷酸钠缓冲液，或
2M的***化钠缓冲液，PH=
使用步骤：建议使用干法填柱
Step1:setuptakeacelllysateand
drawitintothesyringethroughthetubingtip
DrawanyresidualsampleintosyringeAttachsyringeandtubingtiptoa
pre-equilibrated
Bio-canalcolumn
步骤1：平衡安装
首先用至少5倍柱体积的平衡液预平衡柱子，将细胞裂解吸入注射器，并安装在柱头上。
Step2:bindingsample
SlowlyloadthelysateontothecolumnTheproteinswillbind