植物生物技术 第三章.ppt

第三章 植物愈伤组织的诱导与分化培养
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第一节、植物愈伤组织诱导与继代培养
第二节、愈伤组织分化与植株再生
第三节、试管苗的移栽与护理
本章主要内容
第三章
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本章教学目的与要求
掌握愈伤组织、外植体、脱分化、再者形成体细胞胚，这种能够形成体细胞胚的愈伤组织叫做胚性愈伤组织(embryogenic callus)
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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非胚性愈伤组织：不同材料和诱导条件下表现不同，颜色有白色、绿色、黄绿色，质地疏松，水渍状，增殖快；有的成硬块，增殖慢。
胚性愈伤组织：质地较坚实，颜色有乳白色、淡黄绿色或黄色，米粒状、表面光滑、疏松结构的组织
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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第一节愈伤组织的诱导和继代培养
胚性愈伤组织由大小一致的球状或近球状细胞构成，细胞较小，细胞核大、原生质浓厚，无液泡，常富含淀粉粒，分裂活性强。
非胚性愈伤组织细胞形状不规则，不均匀，有长柱形、椭圆形等，细胞较大，细胞核小，有大液泡，含少量原生质。
细胞学特征：
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1、继代培养：愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的继续正常生长，更换一次培养基称一次继代培养(subculture)。
为什么要继代培养？
补充养分
避免毒害
增殖、分化的需要
二、愈伤组织的继代培养
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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2、继代频率:
取决于愈伤组织的生长速度。一般情况下，在愈伤组织生长到直径2－3cm时才将其与外植体分离，4－6周继代一次。
3、方法:
从单细胞产生的愈伤组织，同样可以采用分割愈伤组织块转移到新鲜培养基上的方法进行反复继代培养。
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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悬浮培养(suspension culture):把游离的植物细胞或小块生长旺盛的愈伤组织放入液体培养基中，进行振荡培养，从而使愈伤组织块变成良好分散性的细胞和小的细胞聚集体。
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
三、 悬浮培养
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1、悬浮培养的用途
(1) 提供相对一致的细胞群体（供生化、胚胎发生、胚的同步化研究等)
(2) 原生质体的良好细胞来源
(3) 突变体筛选
(4) 次生代谢物质的生产
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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继代，过30目筛
继代，过50目筛
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
2、悬浮培养体系的建立
接种
转速120-150rpm
2g/50ml
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3、成批培养(batch culture)
指在除了气体和挥发性代谢产物可以同外界空气交换以外的密闭容器中，进行分散细胞的培养。
成批培养的继代方法：
用吸量管或移液器吸取一定量的含有悬浮细胞的液体，然后转接到含有新鲜液体培养基的容器中进行下一批的悬浮细胞培养。
第一节愈伤组织的诱导和继代培养
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继代