Neuropilin1T细胞与CD4CD25调节性T细胞的比较.doc

作者：裴向克，蔡明，周鸿敏，刘畅，徐利军，陈忠华， 石炳毅
【摘要】 目的：分析hburopi I i n 1+T细胞(Np 1+T细
胞)与经典C8+CD25+调节性T细胞(Treg)的关系并比较二者的免疫 调节作用。方法：流式细胞术 than CC4+CD25+Treg. N-p 1+T cel I s nay be regarded as a new subgroup of Treg.
[Keywords ] hteuropi I i n 1; regul atory T cel I; bi ol urrii nescence i nagi ng
[摘 要]目的：分析hburopi I i n 1+T细胞(Np 1+T细 胞)与经典C8+CD25+调节性T细胞(Treg)的关系并比较二者的免疫 调节作用。方法：流式细胞术分析BALB/c小鼠脾脏T细胞上Np 1与CM. CD25的表达关系并分选N p 1+T细胞及CM+CD25+Treg, 通过B16 F10 I uc G5黑色素肿瘤细胞体外培养实验并利用萤
光成像系统，观察比较两种细胞对时细胞杀伤B16 F10 luc
G5黑色素瘤细胞的影响。结果：CM+CD25+Treg中表达Np 1的比 例为(27. 28± )% 明显高于 CC4+CD25-T 细胞的(± 0. 08) % (P<0. 01);在体外实验中，Np 1+T细胞与CC4+CC25+Treg均能 抑制时细胞杀伤B16 F10 luc G5黑色素瘤细胞，Np 1+T
细胞组的肿瘤细胞数目在6、24、48、72h分别为984± 15、1015 ± 14、1261± 21、1323± 38,高于 CM+CC25+Treg 组的 931士 4、983 ± 8、 1201± 18、 1256± 18,两组肿瘤细胞数目在各时间点均有统 计学意义(P<0. 01)o结论：经典CM+CC25+Treg中表达Np 1的 细胞比例较高，Np 1+T细胞有负性免疫调节作用，抑制功能比
CD4+CD25+Treg更强，可以作为一类新的Treg亚群。
［关键词］Neuropi I i n 1;调节性T细胞；萤光成像
调节性T细胞(regul atory T cel I, Treg)是指具有抑制其他 免疫细胞功能的负调控细胞，可分为多种类型，其中研究最多的是 经典CM+CD25+Treg，但包括CD25在内，此种细胞到目前为止仍没 有绝对可靠的分子标志。因此，一些新标志分子如CD127等不断被发 现，神经菌毛素(neuropi I i n 1, Np 1)也是近年来提出的 CM+CD25+Treg新表面分子标志［1 ］,但与之相关的研究甚少。我 们对Np 1+T细胞与经典CM+CD25+Treg的关系及二者免疫调节作 用的比较进行初步探讨。
1材料和方法
(H2d)小鼠，体质量18-20 g, 由华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所实验动物 中心提供。萤光素酶(Luciferase)标记的小鼠B16 F10 I uc
G5 黑色素瘤细胞株(B16 F10 I uc G5 通 I a nona Cel I Li ne)
及精诺真活体成像系统(IVIS Inaigi ng System200 )来自美国
Xenogen公司；BD FACS Ari a流式细胞仪，华中科技大学同济医学院 附属同济医院器官移植研究所。PE Cy5 anti iwuse CCB单克隆 抗体(nAb), APC anti n®use CC4 nAb, FITC anti nrouse CD25 m\b, PE Cy7 l\ anti n®use n^b
均购自美国 eBi osci ence 公司；Neuropi I i n 1 Rabbi t anti nouse 多克隆抗体及 PE Donkey anti rabbi t —抗，英国Abeam公司。小鼠淋巴细胞分 离液(EZ SepTMM)use 1x )购自深圳达科为公司，RPM1640培 养基购自美国Si gna公司，胎牛血清购自杭州四季青公司。

取2只BALB/c小鼠，颈椎 脱臼法处死，75 nl/L乙醇浸泡10niin,超净工作台中无菌开腹、切 取脾脏，按照达科为试剂公司介绍的研磨方法处理：在浸于淋巴细 胞分离液中的200目尼龙网上研磨脾脏，研磨出来的淋巴细胞自动 扩散入淋巴细胞分离液，吸取全部研磨液体于15 nl离心管中，密度 梯度离心法(800 g, 30 niin)获得云雾状淋巴细胞层，用非完全 RPM1640洗涤1次后制备成细胞悬液，显微镜