生化分析仪原理.ppt

检验科 吴 迪
生化分析仪原理
1
临床生化自动分析仪分类
按运行速度：
1．大型生化仪速度600 test / 小时以上
2．中型生化仪速度300-600 test / 小时
3．小型生化仪速度300 test 检验科 吴 迪
生化分析仪原理
1
临床生化自动分析仪分类
按运行速度：
1．大型生化仪速度600 test / 小时以上
2．中型生化仪速度300-600 test / 小时
3．小型生化仪速度300 test /小时以下
按仪器结构：
1．流动式自动生化分析仪
2．离心式自动生化分析仪
3．分立式自动生化分析仪
分立式自动分析仪的主要部件
加样系统
比色系统
分光系统
供排水系统
清洗系统
操作控制与数据处理系统
加样系统
试剂仓
样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、测定缓冲区、样本回收区）
样品取样单元
试剂取样单元
混合部件
比色系统
光源
比色杯
分立式比色转盘
比色杯恒温
水浴、空气浴、恒温液循环间接加热
比色杯类型
硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。
分光系统
干涉滤光片
光栅分光式
无相差蚀刻凹面光栅
后分光集束式光路系统
关于双波长检测的优点
通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而获得稳定的测定结果。
自动生化分析仪的工作程序
计算机进行计算
打印机打印结果
光电感应器检测
样
本
比色杯
比色杯
试
剂
1
比色杯
搅
拌
延迟
试
剂
2
比色杯
比色杯
搅
拌
反应
比
色
传
输
传输
自动分析仪的基本分析方法
终点法
（1点）终点法和2点终点法
速率法
速率法和2点速率法（固定时间法）
终点法
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。
终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。
通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计算出该标本中待测物的浓度。
终点法
终点法
终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两
点终点法。
对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点终点法。
对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点。此即两点终点法。
本质均为终点法。
终点法反应曲线举例（单试剂）
终点法反应曲线举例（单试剂）
终点法反应曲线举例（双试剂）
终点法反应曲线举例（双试剂）
终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）
速率法
速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）。
连续监测速率法：在可见光区(GGT、ALP：405nm黄色)或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段时间内连续监测某一物质的生成 (或消耗的) 速率，计算待测物的活性，一般用于样本中酶活性的检测。
酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km〉〉底物浓度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值（即K值或factor）
连续监测速率法的反应曲线
两点速率法
两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。
设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。
速率法的吸光度计算
速率法吸光度计算：
如读点为21-26 ;
用最小二乘法，得到测光点21-26间每分钟吸光度的变化量。
两点速率法吸光度计算:
 如读点为21-26 ; T 为：(26-21) 点间隔的时间
[(A26+A25)/2-(A21+A20)/2]/T
定标方法
对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立一条标准曲线。
速率法检测的酶类可以采用理论因数法（K因数或Factor法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法）测试亦采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试剂的系统误差。
定标方法——2点定标
两点定标：以水作为零点，标准