《医学研究生开题报告》.ppt

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医学研究生开题报告
一、课题名称
二、研究目的及意义
三、立论依据和研究现状
四、实验方法
五、预期目标
六、已具备条件
七、可行性
八、研究主要阶基因研究结果报道不尽一致;甚至相互背离。这可能与基因存在种族和地区差异性、样本量、研究方法、评定原则相关。
较早的对PVRL1和NSCL/P的相关性研究是2000年美国学者Suzuki Kj等在加勒比海的Margarita Island对CLPED1MIM 225000;MIM 225060患者研究中发现了PVRL1编码的185TGG→T-G和323GGT→GGTT位氨基酸突变;此后在北部委内瑞拉的NSCL/P患者中同样发现了PVRL1编码的185TGG→T-G位氨基酸的突变；同时;他们的研究还证实了该无义突变导致PVRL1编码的肽链的长度缩短;进而可能影响上皮粘附的发生。
然而Scapoli L等2005年在意大利人群中并没有发现W185X的突变;但是他们发现了R199Q、R210H、R212H、D424D这些突变;正常人中这几个氨基酸均为保守序列。
Tseng等2006年在台湾的NSCL/P患者和PVRL1的关联研究中得出的结论是185 和323密码子;特别是W185X的突变;也是并不参与台湾人群的NSCL/P形成。
赵雄等2009年在对江浙地区汉族人群的PVRL1研究中;也没有发现W185X突变或者其他可信的多态性位点;得出结论是PVRL1基因exon3可能不参与江浙人群NSCL/P发病
另外;Avila等2006年在挪威、菲律宾、南美人群中对PVRL1的研究中总共发现了25个与NSCL/P相关的突变位点。其中比较有意义的S112T和T131A均出现在PVRL1 V区的关键氨基酸附近;该区域之前被认为是介导细胞-细胞粘附和细胞-病毒粘附的区域；还有G361V出现在跨膜区;被认为可能影响PVRL1的结构。
Tongkobpetch等2008年发现;泰国CL/P 患者的PVRL1 基因第6 外显子的1183G>A 具有杂合性;会导致395V395M位的缬氨酸被甲硫氨酸取代。
然而舒申友等在2010年对PVRL1的病例对照研究中;并没有发现证据表明S112T、T131A、G361V和V395M参与了广东人群的NSCL/P形成。
Turhani等在2005年欧洲人群的研究中发现CLMPT1基因的内含子IVS7-10G/A;外显子Gly331Gly;Ala88Ala;Pro309Pro的突变联合PVRL1基因的Glu441-Gly442插入Glu突变同时发生的话;可能是NSCL/P的遗传因素。
综上所述;国内外的研究机构对PVRL1基因的多态性与NSCL/P的发病关联性研究中存在比较大的分歧;这样的结果一方面可以理解为人群的遗传背景不同;另一方面也与一些研究中的设计例如样本量;纳入研究范围的样本不同有关系。这样的原因导致统计强度不够;可能存在未被发现的多态性位点或者有意义的已知突变位点被误筛。
四、实验方法
基于以上理论;采取可信公认的研究方法;在PVRL1基因90kbp的bases中筛查可疑的多态性位点;进而对阳性位点附近序列进行测序;而后进行病例-对照研究和家系分析两种分析方法揭示PVRL1基因单个SNP位点或单倍型与NSCL/P的关系;最后揭示PVRL1基因的多态性与环境因素流行病学调查的交互作用与唇腭裂发病的关联;是本研究的技术路线。
路线一
1、病例筛选：选取2008-2010年在我中心住院手术的NSCL/P患者核心家庭200个共600个个体;另外150例NSCL/P患者单纯患者;无父母参与和350例健康志愿者对照组。提取外周静脉血10ml备用。
2、提取所有研究对象共1100份基因组DNA。
3、从人类基因组单体型计划HapMap Project 数据库中已有的891个已知PVRL1基因的SNPs中使用软件SNPbrowser4。0ABI挑选出26个Tag SNPs每个可以代表4000bp碱基段;使用引物单碱基延伸+基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI-TOF的方法行SNP分型并LD检验行单体型分析。
单体型分析图
A six-nucleotide insertion-deletion polymorphism in
the CASP8 promoter is associated with susceptibility
to multiple cancers。 NATURE GENETICS VOLUME 39 NUMBER 5 MAY 2007
4、运用病例对照-研究检验方法揭示单个SNP位点;或者多个SNP位点即单体型块与NSCL/P之间