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蛋白质化学
1．用于测定蛋白质多肽链 N 端、 C 端的常用方法有哪些？基本原理是什么？
解答 ：（ 1） N- 末端测定法：常采用 2, 4―二硝基***苯法、 Edman 降解法、丹磺酰***法。
① 2,4
―二硝基***苯度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。
蛋白质由于带有电荷和水膜，因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中
加入适当的试剂， 破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷， 则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理：破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷。
蛋白质的沉淀可以分为两类：
1）可逆的沉淀：蛋白质的结构未发生显著的变化，除去引起沉淀的因素，蛋白质仍
能溶于原来的溶剂中，并保持天然性质。 如盐析或低温下的乙醇（或***） 短时间作用蛋白质。
2）不可逆沉淀：蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质变性而沉淀，不再能溶于原溶剂。如加热引起蛋白质沉淀，与重金属或某些酸类的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已经变性。
5．下列试剂和酶常用于蛋白质化学的研究中： CNBr ，异硫***酸苯酯，丹磺酰***，脲，
6mol/L HCl β- 巯基乙醇，水合茚三***，过甲酸，胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，其中哪一个最
适合完成以下各项任务？
1）测定小肽的氨基酸序列。
2）鉴定肽的氨基末端残基。
3）不含二硫 的蛋白 的可逆 性。若有二硫 存在 需加什么 ？
4）在芳香族氨基酸残基 基 水解 。
5）在甲硫氨酸残基 基 水解 。
6）在 氨酸和精氨酸残基 水解 。
解答 ：（ 1）异硫 酸苯 ； （ 2）丹黄 ；（ 3） ； - 基乙醇 原二硫 ； （ 4）胰
凝乳蛋白 ；（ 5） CNBr ；（ 6）胰蛋白 。
6．由下列信息求八 的序列。
1）酸水解得 Ala ， Arg ， Leu， Met ，Phe， Thr ，2Val 。
2） Sanger 理得 DNP - Ala 。
3）胰蛋白 理得 Ala， Arg ， Thr 和 Leu， Met ， Phe， 2Val 。当以 Sanger
理 分 得到 DNP - Ala 和 DNP- Val 。
4）溴化 理得 Ala ，Arg ，高 氨酸内 ， Thr ，2Val ，和 Leu，Phe，当用 Sanger
理 ，分 得 DNP - Ala 和 DNP - Leu 。
解答 ：由（ 2）推出 N 末端 Ala ；由（ 3）推出 Val 位于 N 端第四， Arg 第三，而
Thr 第二；溴化 裂解，得出 N 端第六位是 Met ，由于第七位是 Leu，所以 Phe 第八；
由（ 4），第五 Val。所以八 ： Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe 。
7．一个 α螺旋片段含有 180 个氨基酸残基， 片段中有多少圈螺旋？ 算 α-螺旋片
段的 。
解答 ： 180/=50

圈， 50×=27nm ， 片段中含有

50 圈螺旋，其

27nm。
8．当一种四 与 FDNB 反 后，用 水解得到 DNP-Val 及其他 3 种氨基酸；
当 四 用胰蛋白 水解 两种碎片段； 其中一片用 LiBH4 （下 ） 原后再 行酸水
解，水解液内有氨基乙醇和一种在 硫酸条件下能与乙 酸反 生紫 （ ） 色 物的氨基
酸。 四 的一 构是由哪几种氨基酸 成的？
解答 ：（1）四 与 FDNB 反 后， 用 水解得到 DNP-Val ， 明 N 端 Val。
（ 2） LiBH 4 原后再水解，水解液中有氨基乙醇， 明 的 C 端 Gly。
3）水解液中有在 H2SO4 条件下能与乙 酸反 生紫 色 物的氨基酸， 明此氨基酸 Trp 。 明 C 端 Gly － Trp⋯
4）根据胰蛋白 的 一性，得知N 端片段 Val－ Arg （ Lys）⋯ ，以（ 1）、（ 2）、（ 3）
果可知道四 的 序： N－ Val－ Arg （ Lys）－ Trp－ Gly －C。
9．概述 定蛋白 一 构的基本步 。
解答 ：（ 1）