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测定植物抗寒性的方法.docx


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我国植物种类繁多,分布区域广,在晚秋和早春时期发生的冻害和冷害两种低温危害,常常给越冬作物和果木造中,膜系统常常是最先受到伤害的部位,寒害
能使脂膜受损伤,透性加大,细胞内离子(主要是K+离子)外渗量增多,电导率加大。因
此可以用电导仪测定溶液的电导率,求算电解质渗出率(或称伤害率)。伤害率愈高则愈不
抗寒,反之则愈抗寒。
1 .电解质渗出率的测定
,放入试管中,力口10ml去离子水,置25c下10h。用玻璃棒搅拌均匀,然后用电导仪测电导值分别为T1和C1。再将试管放入沸水中10min,待其冷却至25c时,测得处理和对照得电导值为T2和C2,按下式计算电解质渗出率和伤害度:
电解质渗出率(%'
浸泡沌电导率值
,煮海后电导率仅
伤害度(%)
x100%
处理电导率值T1一对,电导率值C1
处理煮沸后电导率值T2一对照煮沸后电导率佗C2
2 .绝对电解质渗出量的测定
有时为了求得电解质的绝对渗出量,需要用分析纯的KCl配成不同浓度的标准液(
-10mmol/L),在25c下测定其电导率值,并绘制电导率(WS/cm)一浓度(mg/ml)
标准曲线。由标准曲线查知样品的外渗电导率值相当于KCl的浓度,再折算每克材料
的绝对外渗量(mg/g),即
绝对电解质渗出量(mg/g),即
绝对电解质渗出量(mg/g)=AXB/W
式中,A—根据样品电导率值,从标准曲线中查出的与KCl相当浓度(mg/ml);
B—浸泡液的体积(ml);
W一样品鲜重(g)。

(1)在电导测定中一般应用去离子水,若制备困难可用普通蒸储水代替,但在测定中
设一空白试管,测定样品时要同时测定其空白电导值,按下式计算相对电导度:
相对电廿度(L)
5-空白电导值
与一空白电导值
(2)CO2在水中的溶解度较高,在测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2
进入试管,以免影响结果的稳定性。
(3)温度对溶液电导影响很大,故S1与S2必须在相同温度下测定。
(二)超氧物歧化酶(SOD)测定
超氧物歧化酶(SOD)是一种清除超氧阴离子自由基的酶,普遍存在于植物体内。
本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四陛(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。
在有可氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化
而产生超氧阴离子自由基,超氧阴离子自由基可将氮蓝四陛还原为蓝色的甲月簪,后
者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子自由基从而抑制了甲月簪的形
成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。
()
130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:。
750科mol/L氮蓝四陛(NBT)溶液:。
100mol/LEDTA-Na2溶液:-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml。
20科mol/L核黄素溶液:。
2 .酶液提取
,加入5ml磷酸缓冲液,冰浴研磨提取,然后15000rpm离心10min,所提上清液为酶液。
3 .显色反应
,-1NBT溶液、130mmol/L甲硫氨酸(MET)溶液、100umol/L乙二***四乙酸二钠(EDTA-Na2)液、20umol/,(对照管加蒸储水)。混匀后将1支对照管置暗处,其它各管于4000lx日光灯下反应20min(要求各管受光情况一致,温度高时间缩短,低时间延长)。
4 .SOD活性测定与计算
反应结束后,以不照光的对照管做空白,分别测定其它各管的光吸收,已知SOD
活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示,按下式计算SOD活性。
SOD总活性=
%乂;XfFX%
SOD比活力=
0OD总活性
蛋白质浓度
式中:SOD总活性以每克鲜重酶单位表示;比活力单位以酶单位/mg蛋白表示;
ACK一照光对照管的光吸收值;
AE一样品管的光吸收值;
V—样液总体积(cm3);
Vt一测定时样品用量(cm3);
W—样重(g);
蛋白质

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  • 时间2022-05-28
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