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分子荧光分析法
分子荧光分析法
基本要点：
1. 理解分子荧光法的基本原理；
2. 掌握分子荧光发射光谱的特1~1013秒内完成，所以通过重叠的振动能级发生内转换的几率要比由高激发态发射荧光的几率大的多，因此，尽管使分子激发的波长有短（1）有长（ 2 ），但发射荧光的波长只有3（>1>2）。
6. 磷光发射：第一电子三线激发态最低振动能级的分子以发射辐射（光子）的形式回到基态的不同振动能级，此过程称为 “磷光发射”。
（磷光的波长4较荧光的波长3稍长，发生过程较慢 约 10-4~10s）
由于三线态 — 单线态的跃迁是禁阻的，三线态寿命比较长，（10-3~10s 左右），若没其它过程同它竞争时，磷光的发生就有可能；由于三线态寿命较长，因而发生振动弛豫及外转换的几率也高，失去激发能的可能性大，以致在室温条件下很难观察到溶液中的磷光现象。因此，试样采用液氮冷冻降低其它去活化才能观察到某些分子的磷光。
总之：处于激发态的分子，可以通过上述不同途径回到基态，哪种途径的速度快，哪种途径就优先发生。
如果—发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比 较快，则荧光发生几率高，强度大。
如果—发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比 较慢，则荧光很弱或不发生。
（三）荧光量子效率：
物质发射荧光的光子数与吸收激发光的光子数的比值。
(1)
数值在 0~1 之间。他的大小取决于物质分子的化学结构及环境（t0c、pH 、溶剂等）。
二. 激发光谱与荧光（发射）光谱
1. 激发光谱：将激发荧光的光源用单色器分光，连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长激发光下物质溶液发射的荧光强度(F)，作F—光谱图称激发光谱。
从激发光谱图上可找到发生荧光强度最强的激发波长ex，选用 ex可得到强度最大的荧光。
2. 荧光光谱：选择ex作激发光源，用另一单色器将物质发射的荧光分光，记录每一波长下的 F，作 F- 光谱图称为荧光光谱。
荧光光谱中荧光强度最强的波长为 em 。
ex 与 em一般为定量分析中所选用的最灵敏的波长。
三. 荧光与分子结构的关系
1. 分子结构与荧光
具有 、 及 n、 电子共轭结构的分子能吸收紫外和可见辐射而发生 -* 或 n - * 跃迁，然后在受激分子的去活化过程中发生 *- 或 *- n 跃迁而发射荧光。
发生 - * 跃迁分子，其摩尔吸光系数（）比 n - * 跃迁分子的大100—1000倍，它的激发单线态与三线态间的能量差别比 n - * 的大的多，电子不易形成自旋反转，体系间跨越几率很小，因此， - * 跃迁的分子，发生荧光的量子效率高，速率常数大，荧光也强。
所以——只有那些具有 - 共轭双键的分子才能发射较强的荧光；
电子共轭程度越大，荧光强度就越大（ ex与 em长移）大多数含芳香环、杂环的化合物能发出荧光，且 电子共轭越长， 越大。
2. 取代基对分子发射荧光的影响
（1）（苯环上