实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群 PPT课件.ppt

多管发酵法测定水中大肠菌群
考查内容:
一、预****报告(包括提问)
二、操作(无菌操作,随机抽看)
三、实验报告
实验十一(综合实验)
多管发酵法测定水中大肠菌群
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料
四、实验步骤
五、实验报告
一、实验目的
1、学****测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵(推测试验):
将不同稀释度的水样,分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中(3倍或1倍乳糖液),经37 ºC培养24 h,观察产酸产气情况,培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂,细菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色,以初步判断是否有大肠菌群存在。
二、实验原理
2)平皿分离(证实试验)
水中除大肠菌群外,尚有其它细菌可能引起糖类发酵,因此需要进一步证实。
将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基,37 ºC培养24 h,根据菌落特征(带核心的、有金属光泽的深紫色菌落),挑取可能为大肠菌群的菌落制片,经革兰氏染色,进一步证实是否为大肠菌群。
3) 复发酵试验(完成实验)
将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中,经37 ºC培养24 h,产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。
产酸、产气分别记为阳性反应,不产酸、产气则记为阴性反应;
根据阳性管数量,查表求得水体大肠菌群的数量。
三、实验材料
1、培养基:
乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置小套管),三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(瓶)(内有倒置小套管),伊红美蓝琼脂平板,灭菌水。
2、仪器或其他用具:
载玻片,灭菌带玻璃塞空瓶,灭菌吸管,灭菌试管等。
四、操作步骤


(1)初(步)发酵实验
水样的稀释: 10-1与10-2
接种:分别吸取1ml 10-2 、 10-1和原水样接入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管;另取10ml原水样接入装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管,混匀后,37 ℃培养24 h,24 h未产气的继续培养48 h。
(2)平板分离
将经24 h和48 h培养后产酸产气的发酵管,分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上,再于37 ℃培养18~24 h,将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
深紫黑色,有金属光泽;
紫黑色,不带或略带金属光泽;
淡紫红色,中心颜色较深。
(3)复发酵试验
将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管查表,即得大肠菌群数。