枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶基因的克隆及表达.pdf

导师签名:\衮茚艮作者签名:蛟鸺作者签名:孕匆虹作者签名:孝彘日期:撕赕菰缕喝天津科技大学日期:讼矿窖年孑月矽不保密回朐诜娇蚰诖颉皏。日期:加月够日保密请在方框内打“学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容。对本文研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。专利权声明本人郑重声明:所呈交的论文涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。年解密后适用本授权书。本学位论文属于势扯誓甓嘣屡‘。
摘要氨酰胺转胺酶基因瘢⒂氪蟪Ω司靥錺嗔菇酥刈楸泶镏柿。将重组表达质粒转入大肠杆菌校菇ㄖ刈榫鶥痯以重组质粒为模板,┰龉劝滨0纷0访富蚴,将其与枯草芽孢杆菌质粒相连,构建了枯草芽孢杆菌重组表达质粒2捎迷侍转化的方法将重组表达质粒H肟莶菅挎吒司鶧中,构建重组菌对大肠杆菌/】『.的诱导条件进行了优化,结果为:当鲫为左右本论文主要研究了谷氨酰胺转胺酶基因在大肠杆菌中的表达,并将该基因转入枯草芽孢杆菌中,实现了该酶的分泌表达。对大肠杆菌/留的诱导表达条件进行了优化,对纯化后的重组蛋白的酶学性质作了初步研究,以枯草芽孢杆菌旧錎为模板,利用际醭晒Φ乩┰龅玫焦重组菌经诱导表达出谷氨酰胺转胺酶。表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,酶活为癉痯,实现了该基因的分泌表达,培养竺富畲锏痝时,添加至终浓度为/蔽露冉抵婵J加盏迹盏际奔湮优化后产物绝大部分以可溶形式存在,酶活由痝岣叩/比优化前提高了的%。采用计亲和柱对重组菌上痯泶锏哪康牡鞍捉写炕源炕蟮墓氨酰胺转胺酶的酶学性质进行了初步研究,结果为:目的蛋白的最适反应温度为℃;在℃下可以保持稳定性,超过℃酶活损失严重;最适值为,;酶活不依赖獵愿妹妇哂幸种谱饔谩关键词:谷氨酰胺转胺酶;克隆;表达;酶学性质~
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