用自然变异分析转基因水稻代谢差异的方法.docx

用自然变异分析转基因水稻代谢差异的方法
用自然变异分析转基因水稻代谢差异的方法
本发明公开了一种用自然变异分析转基因水稻代谢差异的方法；本发明采用超高效液相色谱-质谱联用和气相色谱-质谱联用技术对自然品种水稻种子提取物进行分析得到水稻代子；所述转基因水稻是以非转基因水稻为受体进行基因插入，经过自交并选择具有高赖氨酸蛋白特性的转基因水稻。
[0010]优选地，所述自然品种水稻种子为中国水稻数据库中包含的核心骨干品种。
[0011]优选地，所述对水稻种子提取物进行分析具体包括如下步骤:
[0012]a、取水稻种子样品，分别在液氮中研磨成粉末；
[0013]b、所述样品粉末中加入超纯水，震荡悬浮，悬浮液中加入提取液用以沉淀样品中的蛋白质，离心后，每种样品取三份上清液，氮气下吹干后冷冻抽干，形成三份待测样品，分别进行LC (+)，LC㈠，和GC-MS分析；
[0014]C、将步骤b中LC(+)，LC(_)，和GC-MS分析获得的每个品种每种代谢物的浓度转化为标准分数z-score;将水稻种子代谢物浓度(C)取对数(即:log2C)，对应的z-score= (Log2C-mean) / SD，其中，C为所有品种(包括自然品种、转基因品种及其受体)每种代谢物三个生物学重复浓度的均值，mean为所有自然品种中每种代谢物浓度均值，SD为自然品种中每种代谢物的标准偏差。
[0015]优选地，所述对水稻种子提取物进行分析还包括:采用参照检测组分别进行LC (+)，LC㈠，和GC-MS分析，用于检测分析系统的稳定性；所述参照检测组选自所述步骤b中的三种待测样品混合形成的待测混合物、人的血浆样品、水中的一种或几种。
[0016]优选地，所述步骤b中待测样品用于LC⑴分析时具体为:在待测样品中加入LC(+)稀释液后，采用超高效液相色谱-质谱联用法(UHPLC-MS)测定代谢物，并使用UHPLC-MS (+)模式进行分析。
[0017]优选地，所述步骤b中待测样品用于LC(_)分析时具体为:在待测样品中加ALC(-)稀释液后，采用超高效液相色谱-质谱联用法(UHPLC-MS)测定代谢物，并使用UHPLC-MS (-)模式进行分析。
[0018]优选地，所述步骤b中待测样品用于GC-MS分析时具体为:在待测样品中加入稀释溶剂和衍生化试剂进行衍生化反应，离心后放入GC / MS上样室进行检测。
[0019]优选地，所述对水稻种子提取物进行分析还包括:用生物统计分析软件-R软件将步骤C得到的Z-score值转化成ζ-plot图。
[0020]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:[0021]1、本发明的方法具有简单、快速、重复性好、高灵敏度、高通量等优点，适用于实际样品的批量分析。
[0022]2、本发明建立的水稻代谢轮廓分析方法能够降低在实验过程中引起的误差，方法验证结果良好。
[0023]3、通过质量控制(QC)，实现了对仪器运行过程中保留时间和相应信号的监控，确保了数据的可靠性；而选自所述步骤b中的三种待测样品混合形成的待测混合物、人的血浆样品、水的参照检测组的选用为代谢物测定的质量控制提供了重要的保证。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显: