细胞计数方法------细胞计数板法.pdf

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，在计数时，对沉降在格线上的细
胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下
线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，
本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞
为 3 个。
6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
每个样品重复计数 2-3 次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式
计算出每 mL（g）菌悬液所含细胞数量。
7．测数完毕，取下盖玻片，用水将细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹
擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
三、细胞计数板-计数公式
1、16 格×25 格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=100 小格内细胞个数/100
×400×10000×稀释倍数
标准实用文案
1、25 格×16 格的细胞计数板计算公式：细胞数/ml=80 小格内细胞个数/80×
400×10000×稀释倍数
四、血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误
差,力求准确?
血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺
利，器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误等因素所造成的误差属技
术误差；而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪
器误差，由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域
误差（filed error）。仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误
差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞
分布误差却难于彻底消除。因此，搞好红细胞计数的质量控制一般需采用以下措
施。
1．避免技术误差，纠正仪器误差
（1）所用器材均应清洁干燥，计数板、血盖片、微量吸管及刻度吸管的规格应
符合要求或经过校正。①计数板的鉴定：要求计数室的台面光滑、透明，划线清
晰，计数室划线面积准确。必要时采用严格校正的目镜测微计测量计数室的边长
与底面积，用微米千分尺测量计数室的深度。美国国家标准局（NBS）规定每个
大方格边长的误差应小于 1%，即 1±，深度误差应小于 2%，即 ±
。若超过上述标准，应弃之不用。②血盖片应具有一定的重量，平整、
光滑、无裂痕，厚薄均匀一致，可使用卡尺多点测量（至少在 9 个点），不均匀
标准实用文案
度在 之内。必要时采用平面平行仪进行测量与评价，要求呈现密集平
行的直线干涉条纹。最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于干燥的平面玻璃
上，若能吸附一定的时间不脱落，落下时呈弧线形旋转，表示盖片平整、厚薄均
匀。同时，合格的盖片放置在计数室表面后，与支持柱紧密接触的部位可见到彩
虹。精选出的盖片与其他盖片紧密重合后，在掠射光线下观察，如见到完整平行
的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求。③目前临床实验室多采用一次性微
量采血管采集毛细血管血，除注意定点购买使用信誉较好厂家的产品外，还应对
每一批量的采血管进行抽样检查，可通过水银称重法或有色溶液比色法进行校
正，误差不应超过±1%。
（2）红细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒。
（3）严格操作，从消毒、采血、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是
血样稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一
次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖
片之间的矩形边缘为宜。
（4）报告法定计量单位。
2．缩小计数域误差或分布误差 由于血细胞在充入计数室后呈随机分布或称
e
Poisson 分布（ P(X  k)  (k  0,1,2,) ），而我们所能计数的细胞分布范