下载此文档

多管发酵法测定水中大肠菌群.docx


文档分类:行业资料 | 页数:约6页 举报非法文档有奖
1/6
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/6 下载此文档
文档列表 文档介绍
多管发酵法测定水中大肠菌群一、目的要求 。 。二、基本原理多管发酵法包括初(步)发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。 (步)发酵试验发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基,并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况,培养基内加有溴甲酚紫作为 pH指示剂,细菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽胞菌生长的作用。水样接种于发酵管内,37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成, 并且培养基混浊,颜色改变,说明水中存在大肠菌群,为阳性结果,但也有个别其他类型的细菌在此条件下也可能产气;此外产酸不产气的也不能完全说明是阴性结果。在量少的情况下,也可能延迟到 48小时后才产气, 此时应视为可疑结果,因此,以上两种结果均需继续做下面两部分实验, 才能确定是否是大肠菌群。 48小时后仍不产气的为阴性结果。 (远藤氏培养基, Endo 's medium )或伊红美蓝琼脂( eosin methylene blueagar ,EMB agar ),前者含有碱性复红染料,在此作为指示剂,它可被培养基中的亚硫酸钠脱色, 使培养基呈淡粉红色,大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应,形成深红色复合物,使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色。亚硫酸钠还可抑制其他杂菌的生长。伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料, 在此亦作为指示剂,大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时,该两种染料即结合成复合物,使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的、带核心的、有金属光泽的深紫色(龙胆紫的紫色)菌落。初发酵管 24小时内产酸产气和 48小时产酸产气的均需在以上平板上划线分离菌落。 ,经涂片染色为革兰氏阴性无芽胞杆菌者,通过此试验再进一步证实。原理与初发酵试验相同,经 24小时培养产酸又产气的,最后确定为大肠菌群阳性结果。三、器材乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置小套管),三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(瓶)(内有倒置小套管),伊红美蓝琼脂平板,灭菌水; 载玻片,灭菌带玻璃塞空瓶,灭菌吸管,灭菌试管等。四、操作步骤 。 (1)初(步)发酵试验在 2个含有 50ml 三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中,各加入 100ml 水样。在 10支含有 5ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中,各加入 10ml 水样(如图ⅩⅣ-1)。混匀后,37℃培养 24小时,24 小时未产气的继续培养至 48小时。(2)平板分离经 24小时培养后,将产酸产气及 48小时产酸产气的发酵管(瓶),分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上,再于 37℃下培养 18 —24小时,将符合下列特征的菌落的一小部分,进行涂片,革兰氏染色, 镜检。(a)深紫黑色、有金属光泽。(b)紫黑色、不带或略带金属光泽。(c)淡紫红色、中心颜色较深。(3)复发酵试验经涂片、染色、镜检,如为革兰氏阴性无芽孢杆菌, 则挑取该菌落的另一部分,重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中, 每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落 1—3个,37℃培养 24小时, 结果

多管发酵法测定水中大肠菌群 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

非法内容举报中心
文档信息
  • 页数6
  • 收藏数0 收藏
  • 顶次数0
  • 上传人hb4el96
  • 文件大小138 KB
  • 时间2017-05-15