实验二 过氧化氢的测定.docx

实验二：植物组织过氧化氢含量的测定
一、 实验目的
掌握植物组织中过氧化氢含量的定量测定原理
了解H2O2对植物大分子物质的损害机理
二、 实验原理
植物组织内积累的H2O2是由一些氧化酶（主要是超氧化物歧化酶SOD） 催化超阳阴实验二：植物组织过氧化氢含量的测定
一、 实验目的
掌握植物组织中过氧化氢含量的定量测定原理
了解H2O2对植物大分子物质的损害机理
二、 实验原理
植物组织内积累的H2O2是由一些氧化酶（主要是超氧化物歧化酶SOD） 催化超阳阴离子发生氧化反应而形成。H2O2相对超阳阴离子性质较稳定，但 还是一种催化剂，它的存在可以直接或间接地导致细胞膜脂过氧化损害，加 速细胞衰老和解体。同时也有积极地一面，如参与植物抗病性和抗逆性的启 动和诱导性过程。因此，了解植物组织中H2O2的代谢具有重要意义。
H2O2与硫酸钛（或四***化钛）反应生成过氧化物一一钛复合物黄色沉淀， 溶解于硫酸后，在波长410nm出有最大吸收峰，可以进行比色测定。在一定 范围内，其颜色深浅与H2O2浓度成线性关系
TiSO4 + NH3 + H2O2^ O2-
TiSO （TiO ） + HO - [TiO（HO）]l + H SO, 4、 2 2 2 2 2 2 2 2 4
三、 实验材料、设备和试剂
实验材料：雀麦叶片（经过冰冻的和未经冰冻的）
实验设备：研钵、离心管、离心机、试管、容量瓶、分光光度计等等
实验试剂：①4°条件下处理的*** ②5umol/ml H2O2③浓氨水
④ 5% TiSO4 ⑤ 2mol/L H2SO4
四、 操作步骤
制作标准曲线
取7支试管，编号1-7,在通风橱中向各试管加入表1所列试剂，混匀，充 分反应后会有沉淀形成，5000r/min,离心5min。留沉淀，弃上清液，并向各试 管沉淀中加入
2mol/L H2SO4 5ml，摇动，使沉淀完全溶解。以1号试管对照调零， 波长410nm处比色测定溶液的吸光度。以吸光度值为纵坐标，过氧化氢物质的量 为横坐标，制作标准曲线（图一）。
表1
H2O2浓度标准曲线试剂加入量
项目
管号
1
2
3
4
5
6
7
5umol/ml H2O2/ml
0






4°预冷***/ml






0
浓氨水/ml







5% TiSO』
4







相当于 H2O2的物质的量/umol 0






测定样品中过氧化氢的量
称取样品3&，加入3ml预冷的***，在通风橱中冰浴条件下（由于气温低， 可以不必使用冰浴）研磨成匀浆后，静置片刻，加***定容至5ml，5000r/min,
离心5min。留上清液，并取上清液1ml，加入5% TiSO4 ，， 出现沉淀后加入2mol/L H2SO4 5ml使之充分溶解，然后进行比色测定。
五、结果处理
根据溶液吸光度，在标准曲线上查出相应的过氧化氢的物质的