一种检测赭曲霉毒素a的磁性免疫层析试剂盒及制备方法.docx

一种检测赭曲霉***a的磁性免疫层析试剂盒及制备方法
一种检测赭曲霉***a的磁性免疫层析试剂盒及制备方法
本发明涉及一种检测赭曲霉***A的磁性免疫层析试剂盒，包括至少一个试纸条和一个超顺磁性复合粒子标记赭曲霉***A抗体溶液；所述试纸条由反述样品垫1为纤维素膜或玻璃纤维膜或玻璃纤维与纤维素的混合膜。
[0013] 所述样品垫2为经样品垫处理液预处理的纤维素膜或玻璃纤维膜或玻璃纤维 与纤维素的混合膜。% -2%BSA，1 % -5%蔗糖， 0? 5% -3% 曲拉通X-100 的 0? 01MPBS，pH7. 0-7. 6。
[0014] 所述吸水垫为纤维素膜。
[0015] 所述超顺磁性复合粒子标记0TA抗体溶液为0TA抗体与超顺磁性复合粒子以肽 键共价结合形成的聚合体溶解在保存液中形成的溶液。所述保存液例如为1%BSA，0. 5% Tween-20, 5%蔗糖的pH8. 5的硼酸缓冲液。
[0016] 所述超顺磁性复合粒子为Fe304纳米粒子，粒径为50-300nm，优选为100-200nm。 所述超顺磁性复合粒子表面带有易于与OTA抗体偶联的基团，这些基团可以是羧基、氨基 等基团，优选的基团是羧基基团。
[0017] 本发明还涉及用于制备本发明的检测0TA的磁性免疫层析试剂盒的制备方法，包 括以下步骤：
[0018] ：
[0019] (1)将超顺磁性复合粒子、1-乙基_(3_二***氨基丙基）碳二亚***（EDC)、N_羟 基丁二酰亚***（NHS)、pH= 4. 7的2-(N-吗啡啉）乙磺酸（MES)缓冲液 混匀，EDC与NHS的摩尔比为1 : 2,在37°C下反应大约30min，得到活化的磁性粒子；
[0020] (2)将步骤⑴得到的活化的磁性粒子、0TA抗体和浓度为50mMpH= 8. 5的硼酸 缓冲液混匀，37°C反应3. 5h，得到偶联后磁性粒子反应液；（3)向步骤（2)中的反应液加入 含有BSA的例如50mMpH= 8. 5的硼酸缓冲液，使BSA终浓度为5%，在37°C下反应30min， 得到含有封闭后磁性粒子的反应液；再将封闭后的磁性粒子进行洗涤、保存，得到超顺磁性 复合粒子标记0TA抗体；所述洗涤液为50mMpH= 8. 5的硼酸缓冲液，所述保存液为1 % 85八，%1'冊611-20,5%；
[0021]：用例如含有1% -2%、pH7. 0-7. 6的包被缓 -2mg/mL的浓度，并通过定量喷液装置例如以 0. 8-1. 5yL/cm的量分别将二者喷到***纤维素膜上，分别形成检测线和质控线，0TA抗原 与抗抗体的间隔（即检测线和质控线之间的间隔）-lcm之间，喷完后晾干，放入干燥 器中备用；
[0022] ：将样品垫放入样品垫处理溶液中浸泡例如大约0. 5-2小时 后取出，在大约25°C-35°C烘干大约6-12小时；
[0023] % -2 %BSA，1 % -5 %蔗糖， 0? 5%