实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价.doc

(整理)实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价.
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实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素加热融化后，放冷至50-60℃，加入菌悬液合适（能得清楚的抑菌圈为
度）,摇匀，在每1双碟中分别加入5ml，使在基层上平均摊布，作为菌层。放置水
平台上冷却后，在每1双碟中以等距离平均部署不锈钢小管（±，高
±，±）4个，用陶瓦圆盖覆盖备用。
三、二剂量检定法
取照上述方法制备的双碟不得少于4个，在每1双碟中对角的2个不锈钢小管
中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的高低两
种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2：1或4：1。在35-37℃条件下培养
14-16小时后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法中的()法
进行可靠性测试及效价计算。
四、硫酸庆大霉素的效价测定：
标准品溶液的配制：精美称取硫酸庆大霉素标准品合适，加乙醇溶解后，用
灭菌水制成每1ml中含1000单位的溶液，作为贮备液，置5℃以下的冰箱中保存，
可使用7日。，使标准品高剂量溶液和低剂量
溶液每ml中分别含硫酸庆大霉素10U和5U。
：取硫酸庆大霉素肠溶片4片，研细，用乙醇合适（硫酸
，用乙醇25ml），分次研磨使硫酸庆大霉素溶解，并用水稀释成每
1ml中约含1000单位的溶液，摇匀，静置，精美量取上清液合适，按（1）法同法
配制，使供试品高剂量溶液和低剂量溶液按标示量计算每ml中含硫酸庆大霉素分别
为10U和5U。
测定法：按二剂量检定法测定效价，计算出供试品中含硫酸庆大霉素相当于标示量的百分数。
附录：生物检定统计法中的（
）法
抗生素微生物检定法是以微生物为工具，不能防范地存在着较大的生物差别性，
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因此，必定借助于生物统计方法来减少生物差别对检定结果的影响，使结果达到必然的精确度。英、美、日等国家药典附录中都详细地拟定了生物检定方法的实验设计和统计解析，并依照生物统计的要求规定了各个品种的误差范围。中国药典从1985年版起增加了生物检定法的实验设计和可靠性测试及误差估计等内容，这对判
断检验质量及促使检验方法的改进等方面都拥有重要意义。
可靠性测试
抗生素微生物检定法依照观察的方法和生物反响的种类属量反响，即观察每一
反响自己所表现的程度，能够用量来表示。实验设计采用供试品（T）和已知效价的
标准品（S）比较试验的平行线原理。由于平行线测定的计算原理是在必然剂量范围
内T和S的对数剂量与反响或反响的特定函数呈直线关系以及在T和S两条直线互
相平行（当T和S的活性组分基真相同时）的基础上，因此，可靠性测试就是运用
统计方法来考据明验结果可否吻合量反响的平行线设计原理，可否明显偏离了直线
性和平行性，以便议论实验结果的可靠性。对不是明显偏离平行偏离直线（在必然
的概率水平下）的实验结果，认为可靠性成立，方可按有关公式计算供试品的效价
和可信限。
可靠性测试的统计方法
抗生素微生物检定法的可靠性测试采用F测试，即实验结果的方差解析。方差
解析为测试多组均数之间的差别可否明显。经过统计运算求得试品间、回归、偏
离平行、剂间及碟间项的方差，并以统计得的以上各项方差和误差项方差（S2）
各该项方差
的比值称F值（各项
F值=
）作为指标来观察其差其余明显性
误差项方差（S)
程度。
将实验结果求得的
F值，按相应各项的自由度及误差项的自由度查
F值表来判
断实验结果求得的F值是大于还是小于
。
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