寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学习记忆及海马区ChAT的影响.doc

1 寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学****记忆及海马区 ChAT 的影响作者:牛彩琴徐厚谦张团笑【摘要】目的观察寿聪胶囊对老年痴呆( AD )模型大鼠的学****记忆、海马区乙酰胆碱转移酶( ChAT ) 阳性细胞的表达及病理形态学影响, 探讨寿聪胶囊的防治机制。方法选用 Wistar 雄性大鼠随机分成五组: 对照组、模型组、脑复康组及寿聪胶囊低、高剂量组。用D拟半乳糖和东莨菪碱制备复合 AD 大鼠模型,应用中药复方制剂寿聪胶囊进行防治。用跳台法测试大鼠的学****记忆能力、免疫组化法观察海马区 ChAT 阳性细胞的表达变化、光镜下观察脑组织病理形态学的改变。结果寿聪胶囊组跳台潜伏时间明显延长、触电错误次数显著减少,海马区 ChAT 的阳性细胞数目显著增多、且染色大多呈阳性, 脑组织病理损害明显减轻; 与模型组相比均有显著性差异(P< ) ,与脑复康组相似(P> ) 。结论寿聪胶囊能提高 AD 大鼠学****与记忆能力, 减轻脑组织的病理损害, 可能与拮抗东莨菪碱所致胆碱能神经系统的功能损害,提高 ChAT 活性,促进 Ach 合成有关。 2 【关键词】寿聪胶囊;老年性痴呆;东莨菪碱; D拟半乳糖;乙酰胆碱转移酶现代医学尚缺乏对于 AD 有效的防治方法, 近年大量临床报道, 中药复方制剂对 AD 的防治有较好的临床效果〔1,2〕。中医认为肾虚精亏、痰瘀互阻是 AD 的主要发病机制,以“补肾填精、涤痰通络”为治法,配制中药复方制剂寿聪胶囊,经初步临床观察疗效较好,但其作用机制有待进一步研究。本实验选用 Wistar 大鼠, 根据 AD 患者常见的胆碱能神经系统损害学说〔 3〕,用 D拟半乳糖和东莨菪碱制备 AD 复合模型〔4~6〕。通过行为学、 ChAT 及病理形态的观测, 探讨寿聪胶囊对 AD 大鼠的防治机制,为临床应用提供理论支持。 1 材料与方法 动物与分组健康 Wistar 雄性大鼠(兰州大学医学实验中心提供) 清洁级,体重(250 ± 50)g ,共 40 只。常规饲养 1w 后,随机分为 5组: 对照组, 模型组, 脑复康组, 寿聪胶囊低、高剂量组,每组 8 只。 3 药物与试剂寿聪胶囊以何首乌、红参、岷当归、锁阳、三七、丹参、泽泻、石菖蒲等中药组方,按一定的剂量比例配制,生药粉碎研磨, 由甘肃中医学院附属医院药剂科生产( 批号: 030102 , / 粒);D拟半乳糖和东莨菪碱由上海恒信化学试剂有限公司提供( 批号分别为: 20030926 、 613K2102201 ); 脑复康由西安交大瑞鑫药业有限公司提供(乙酰***吡咯烷***,批号: 20031101 ) ;乙酰胆碱转移酶( ChAT )免疫组化测定试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。 模型制备在脑复康组和寿聪胶囊灌胃防治的第 10 天开始造模。除对照组用生理盐水外, 其余各组每天颈背部注射 D拟半乳糖 % (5 ml· kg-1 · d-1 )3w后; 改用腹腔注射东莨菪碱 mg/ml (2 mg · kg-1 · d-1 )2w。 给药方法分组后第二天开始各组每天灌胃,除对照组和模型组 4 用等量的生理盐水外,其余各组用相应的药物进行防治。脑复康组用脑复康 290 g/L( g· kg-1 · d-1) 灌胃, 寿聪胶囊组分别用低剂量 54 g/L ( g· kg-1 · d-1) 和高剂量 162 g/L( g· kg-1 · d-1) 灌胃。共 50d。 主要实验仪器跳台仪( 由甘肃中医学院实验中心提供)、 AO 病理切片机(兰州大学病理实验中心提供) 、紫外分光光度计(型号: LIV 拟 120 拟 02, 日本岛京仪器厂); 荧光分光广度仪(型号: RF 拟 5301PC , 日本岛京)、照相显微镜( 型号: Bx60 拟 32FB3 拟 F01 , 0LYMPUS )等。 观察指标 行为学检测行为学测试用跳台法。分组后当天进行跳台训练:将大鼠放置在跳台仪内, 适应环境 5 min ,每只大鼠训练 5 次, 然后通电, 大鼠逃到安全台上开始记时, 至大鼠从安全台上跳下停止记时,此段时间为潜伏期,大鼠 5 min 内从安全台上跳下受到电击的次数为错误次数。训练后第二天进行防治 5 前的跳台测试,在实验最后一次给药 2h 后进行第二次跳台测试,记录各组大鼠的跳台潜伏时间和受到电击的错误次数。 ChAT 免疫反应阳性细胞的检测最后一次行为学测试后,当天禁食,第二天进行标本采集。依次将各组大鼠迅速处死,在冰台上取出脑组织,沿矢状缝切开, 甲醛固定, 石蜡包埋。在兰州大学病理实验中心,将每个标本的一半脑组织取海马做 ChAT 的免疫组化法检测,免疫组化的封