MACS磁珠分选.doc

MACS磁珠分选
MACS磁珠分选
三、磁分离细胞的重要指标
纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。
四、目前市场上
MACS磁珠分选
MACS磁珠分选
三、磁分离细胞的重要指标
纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。
四、目前市场上有2种磁性细胞分离系统
1、Small particles (≈50 nm) － MACS
2、Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）
五、小磁珠
1、优点
（1）对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。
（2）可直接上流式检测，不影响散射光。
2、缺点
（1）需要很强的磁场来分离细胞。
（2）分离速度很慢，得率不高。
（3）一次性的分离柱，不能在普通试管进行。
（4）成本昂贵。
六、大磁珠
1、优点
（1）技术简单，分离可在试管中完成。
（2）易于增减细胞用量。
（3）速度快，得率高
（4）成本低
2、缺点
（1）对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。
（2）纯度低。
（3）容易阻塞FCM的喷嘴。
磁珠分选细胞注意事项
磁珠分选细胞注意事项
1、待分选细胞中如有贴壁细胞，建议在分选前先贴壁培养去除，或者提高EDTA浓度。
2、抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞。
3、新鲜分离骨髓细胞，先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化，可使细胞团块解聚，从而提高分离效率。
4、上分离柱前，充分振荡，混悬细胞，打散细胞团块。
5、用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使分离柱不被气泡阻滞。
6、细胞悬液加入分离柱中时，应将滴管伸至底壁后加入，避免将细悬液沿管壁流入，使管壁残流末分选细胞，以致后继洗柱过程中，因疏忽末被洗下，最后导致纯度不高。洗柱时，应在前次液体充分流尽后，再加洗液。
7、分选细胞量应根据说明书控制，不超量。
8、孵育时间和温度应按说明书进行，延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。
9、先用抗体阻断Fc受体，可降低非特异性结合。
免疫磁珠分离法用的分离柱
不同的厂家生产的磁珠的大小，性能有可能不同。比如MACS的磁珠小，用分离柱分离。而BD产的磁珠是中号的，磁力大，不用分离柱，普通小试管加上分离器就可以分离细胞。如果都是用分离柱，厂商不同的话，最好看看说明，磁珠大小，磁力等性状如何，是否相似。当然，最好