使用说明书.doc

中文使用说明书 North2South 生物素标记和化学发光检测试剂盒目录号: 17175 ( 17075 , 37549 , 37555 , 89880 ) 该试剂盒由探针标记,杂交洗膜和化学发光检测三部分组成 17075 (探针标记,纯化和定量) North2South ™生物素随机引物 Kit( 该试剂盒含有足以完成10 次标记反应的试剂, 每次可合成至少1ug 的生物素标记的探针) 产品名称: 货号产品描述 17075 North2South ™生物素随机引物 Kit 10 次标记反应,每次可合成至少 1 ug 的生物素标记的探针) Kit 组分: Heptanucleotide mix (5X), 100 µl dNTP mix (5X) (1 mM dATP, 1 mM dTTP, 1 mM dGTP, dCTP), 80µl Reaction Buffer (10X), 50µl DNA Polymerase, Klenow fragment (3´ -5´ exo-),(10 units/ µ l), 10µl Non-biotinylated control DNA*, (250 ng/ µ l), 5µl EDTA, (500 mM, pH ), 1 ml Nuclease-free water, 1 ml NH 4 OAc, (5 M), 1 ml Biotin-d U TP, 20µl 储存条件: 所有试剂应该在无霜冷冻- 20° 冰箱保存探针标记: 操作步骤: 将 20ul 生物素标记的 N 4 -dCTP 与 80ul 的 5XdNTP 混合物充分混合备用(总量 100ul ) 1. 稀释约 100ng 线性探针模板至 24ul 于离心管中( 模板 DNA 要定量和纯化) 2. 加入 10ul 随机引物( Heptanucleotide mix ) 于上述离心管中, 煮沸变性 5 分钟, 迅速在冰水混合物退火 5 分钟 3. 加入 10ul N 4 -dCTP 与 5XdNTP 的混合物, 5ul 反应缓冲液, 1ul Klenow 酶片断,混匀 4. 37° 孵育 60 分钟 5. 加入 2ul EDTA 以灭活 Klenow 酶活性探针纯化操作步骤: 1. 加入 5ul NH 4 OAC 于上述 50ul 反应离心管,吹打混匀 2. 加入 110 ul 冰预冷的无水乙醇,充分混匀,冰或- 70° 放置 15 分钟 3. 12000 rpm 4° 离心 15 分钟 4. 观察沉淀情况,小心吸取出上清,风干沉淀 5. 用冰预冷的 70 %乙醇洗涤一次, 12000 rpm 4° 离心 15 分钟,观察沉淀情况,小心吸取出上清,风干沉淀 6. 50ul TE或 RNA 酶 free 的水溶解沉淀(- 20℃或- 70℃长期保存) 探针定量( 17075 ) 操作步骤: 1. 500ul 去离子水, 260nm 调零 2. 充分混匀 探针和 去离子水(即稀释 20 倍)分光光度计测定 OD 260值 3. 定量计算公式: 1 OD 260 dsDNA = 50μ g/ml ; 样品浓度( μ g/ml )= OD值 X50X 稀释倍数; 样品浓度μ g/ul = OD 260值 X50X20/1