鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及 机制探讨.doc

鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及 机制探讨
[摘要] 目的 探討鳖甲煎丸对腹膜透析(PD)小鼠腹膜纤维化的抑制作用及可能机制。 方法 % mL每日腹腔注射一次,并于第3、5、7天联合脂多糖0he peritoneal thickness of the parietal peritoneum decreased(P<). The visceral peritoneal ZO-1 protein expression increased, N-cadherin protein expression decreased, and pAkt also significantly decreased(all P<). Conclusion Biejiajian pill inhibits peritoneal fibrosis, and the regulation of epithelial to mesenchymal transition(EMT) of peritoneal mesothelial cells from PI3K/Akt signal is one of its mechanisms.
[Key words] Biejiajian pill; Peritoneal dialysis; Peritoneal fibrosis; Epithelial to mesenchymal transition; PI3K/Akt signal 腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)因为腹膜纤维化而导致超滤失败,已成为患者退出腹膜透析的主要原因之一[1]。腹膜间皮细胞上皮-间皮细胞转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是腹膜透析发生腹膜纤维化的基础[2,3]。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-kinase/Protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路,可调节PD腹膜间皮细胞EMT的发生,导致腹膜纤维化的发生和发展,PI3K/Akt信号为腹膜纤维化防治的新靶点[4,5]。鳖甲煎丸用于胁下癥块,具有活血化瘀、软坚散结的作用。鳖甲煎丸具有显著的抗肝、肾、肺纤维化作用[6-9],但未见治疗腹膜纤维化的报道。本研究通过超滤量、壁层腹膜厚度等指标观察鳖甲煎丸治疗腹膜透析小鼠腹膜纤维化的疗效;并通过观察脏层腹膜组织ZO-l、N-cadherin及pAkt等蛋白表达水平,从PI3K/Akt信号调节EMT的角度探讨鳖甲煎丸干预腹膜纤维化的机制,现报道如下。
1 资料与方法
实验动物
清洁级雄性ICR小鼠24只,鼠龄6~8周,体重25~30 g,购自福建医科大学实验动物中心,合格证号[SCXX(闽)2016-0002]。于12 h光照、恒温(22±2)℃、40%~60%相对湿度条件下标准饲料喂养,自由饮水。常规适应性喂养1周后进行实验。动物实验过程遵守福建中医药大学关于动物实验伦理学的相关规定。
主要试剂
鳖甲煎丸(50 g/瓶,国药准字Z42020772,国药集团中联药业有限公司);%腹膜透析液(广州百特医疗用品有限公司);脂多糖:sigma,货号L2880;抗phospho-Akt1Ser473抗体9018S、抗Akt1抗体2398S(美国CST);抗ZO-1(ab216680)、N-cadherin(ab18203)、GAPDH抗体(ab181602)(Abcam公司);HRP标记的兔二抗(Abcam公司);BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA裂解液、超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天)。
模型制作与给药方法
24只ICR小鼠均分三组(n=8):(1)对照(Control)组,左下腹腹腔注射(Intraperitoneal injection,ip) mL,每日一次。(2)腹膜透析(PD)组,% mL左下腹ip,每日一次,并于第3、5、7天联合ip脂多糖(Lipopolysaccharide,Lps) mg/kg造模, mg/mL, mL/10 g每日ip一次;对照组予匹配同量生理盐水。(3)鳖甲煎丸(BJJW)组,造模同腹膜透析组,给予鳖甲煎丸( g/kg) g/mL溶液, mL/10 g每日灌胃一次。 mL/10 g每日灌胃一次。干預6周。
试验取材
第42天透析1 h末,用4%水合***醛麻醉小鼠。