高效液相色谱分析 (7)精选PPT.ppt

关于高效液相色谱分析 (7)
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第一张，共六十张，创建于2022年，星期一
概述
HPLC仪器
包括：高压输液装置; 进样系统; 分离系统; 检测系统;辅助系统
流动相和固定相简介填充情况无关，使用较多。有机械注射式和机械往复式两种。应用最多的是机械往复式恒流泵(见下图。每分钟往复25~100次，因此脉动小。对流量变化敏感的检测器也会有噪声干扰，此时可连接一脉动阻尼器)。
第十张，共六十张，创建于2022年，星期一
马达
往复式拉动
密封
溶剂
球阀
脉动阻
尼器
到色谱柱
机械往复柱塞泵示意图
4）梯度淋洗装置：在分离过程中逐渐改变流动相组成的装置。如果只有一个泵，可采用低压混合设计（将两种或以上的溶剂按一定比例混合，再由高压泵输出）；如果有两个或以上泵，调节各自的流量，在高压下混合。
第十一张，共六十张，创建于2022年，星期一
2. 进样系统
与GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所产生的峰形展宽相对要小些。即，HPLC的展宽多因一些柱外因素引起。这些因素包括：进样系统、连接管道及检测器的死体积。进样装置包括两种。
1）隔膜注射进样：使用微量注射器进样。装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。
2）高压进样阀：目前最常用的为六通阀。由于进样量可由样品管控制，因此进样准确，重复性好，如图。
装入样品
出口
进样
采样环
泵入溶剂
进色谱柱
第十二张，共六十张，创建于2022年，星期一
3. 色谱柱
1）对色谱柱的要求：内壁光滑的优质不锈钢柱，柱接头的死体积尽可能小。柱长多为10~30cm，内径为4~5mm(尺寸排阻色谱柱常大于5mm，制备色谱柱内径更大)；
2）柱的填充：主要采用匀浆法。根据使用匀浆试剂的性质不同可分为：
平衡密度法：
使溶剂密度和填充颗粒密度相近，此时颗粒沉降速度趋于0。常用的匀浆试剂有四***乙烯、四溴乙烷和二碘甲烷等；
非平衡密度法：
采用粘度较大的试剂，如CCl4，CH3OH, ***，二氧杂环已烷、THF等。
填充方法：填充时，按上述方法制作匀浆液，用流动相充满色谱柱及其延长管中，然后将匀浆液倒入匀浆填充器，在较高压力下迅速将其注入色谱柱内。要求填充速度快(防凝聚、沉降或结块)、且无空气进入(影响填充均匀性)。
第十三张，共六十张，创建于2022年，星期一
4. 检测器
液相色谱检测器包括紫外吸收、荧光发射、示差折光和安培检测器等。
1）紫外检测器
其检测原理和UV-Vis方法一样。只是此时所采用的吸收池为微量吸收池，通常其光程为2-10mm, 体积约为1~10 L。
HPLC分析中，约有80%的物质可以在254 nm或280nm处产生紫外吸收。因此该类检测器应用很广。
在选择测量波长时注意：溶剂必须能让所选择的光透过，即所选波长不能小于溶剂的最低使用波长。
石英窗
接色谱柱
UV
光电倍增管
废液
第十四张，共六十张，创建于2022年，星期一
波长
可的松
***美松
皮质***
快速扫描—光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱-光谱图
第十五张，共六十张，创建于2022年，星期一
2）荧光检测器
许多有机物具荧光活性，尤其是芳香族化合物具有很强的活性。荧光检测器是一种选择性很强的检测器，其灵敏度比UV检测器高2~3个数量级。
3）示差折光检测器
原理：利用两束相同角度的光照射溶剂相和样品+溶剂相，利用二者对光的折射率不同，其中一束（通常是通过样品+溶剂相）光因为发生偏转造成两束光的强度差发生变化，将此差示信号放大并记录，该信号代表样品的浓度。
为通用型检测器，灵敏度为10-7g/mL。但对温度变化敏感，且不适于梯度淋洗
光源
调零
光学零
参比
样品
平面镜
透镜
光电转换
记录仪
放大器
遮光板
第十六张，共六十张，创建于2022年，星期一
4）安培检测器
由恒电位仪和一薄层反应池（体积为1~5L）组成。如图。
该检测器是利用待测物流入反应池时在工作电极表面发生氧化或还原反应，两电极间就有电流通过，此电流大小与待测物浓度成正比。
采用安培检测器时，流动相必须含有电解质，且呈化学隋性。它最适于与反相色谱匹配。但此检测器只能检测具有电活性的物质。
接参比电极
和对电极
接色谱柱
Teflon
塑料块
1 cm
工作电极
(Pt, Au, 碳糊)
第十七张，共六十张，创建于2022年，星期一
5）电导检测器
电导检测器主要用于离子色谱的检测。
其原理是基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电阻的