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分光光度计的检定.doc
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分光光度计的检定
分光光度计检定方面的知识汇总光度计, 检定, 分光, 知识, 汇总
本帖最后由 zfxly 于 2009-4-28 15:35 编辑
俺对自己总结的检定的一些方法总结如下,希望对大家有个参考. 注:以下仅代表个人观点.
检定规程规定:检定周期为半年,两次检定合格的仪器检定周期可延长至一年. 1 波长准确度的检验
仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间的误差.
1.1可见区:一般采用窄吸收的溶液,滤光片或蒸汽或放电灯泡发射的射线来校准.
一般绘制镨铷滤光片的吸收光谱曲线,镨铷滤光片的吸收峰在528.7nm和807.7nm.
若相差±3nm以上,调节校正螺丝;若相差±10nm以上,重新调整钨灯灯泡位置或检修单色器的光学系统.
个人认为,以上指标对老仪器比较适用,比如721,7230等,如果现在比较好的一些仪器出现那么大的差别,早该被淘汰了.至于现在一些比较好的仪器波长准确度相差多少,还没有一个定论,一般要小于0±0.5nm.俺也在研究.不过有一点俺是要指出的,就是不能用老的指标来衡量新的仪器,这是非常不科学的. (建议:别的一些指标,有用滤光片的,也有用溶液的,不过据我所知,现在用滤光片已经成为主流,就我个人而言,,滤光片的波长非常准确,而且非常稳定,一般检定起来比较容易.但有其自身的缺点,那就是价格比
较昂贵.相对而言,溶液则比较便宜,在市场经济高度发达的今天,首先要考虑的就是成本.如果是自己实验室检定,用溶液就可以了.)
1.2紫外区
用苯蒸汽的吸收光谱曲线.(不过现在均改用滤光片,苯有毒,对人对环境都有危害,而且苯蒸汽挥发扩散不均匀)
具体做法是:在吸收池里滴一滴液体苯,盖上吸收池盖,待苯挥发充满整个吸收池后,就可以绘制苯蒸汽的吸收光谱.若实际测定结果与苯的标准光谱曲线不一致,表示仪器波长误差,必须加以调节.
1.3利用氘灯的C线和F线(俺以2550为例进行说明)
波长准确度利用氘灯的特征峰的波长进行检查,2 个峰分别位于 486.0 nm 和 656.1 nm,
1.3.1 F线
测定方式: 能量
记录范围: 0 (低)~100 (高)
波长范围: 660 (开始)~650 (结束)
扫描速度: 中等
采样间隔: 自动
选择仪器参数表设置测定参数如下:
灯:D2 (氘灯)
检测器: PM
PM 增益:2
狭缝宽: 0.2
采样间隔:自动
UV2550 峰的波长应该在 655.8 nm ~ 656.4 nm.
1.3.2 C线
再次用相同的步骤对测定氘灯的另一个特征峰:
记录范围: 0 (低) ~ 10 (高)
波长范围: 490 (开始) ~ 480 (结束)
本例中,UV2550峰的波长应该在485.7 nm ~ 486.3 nm,
操作及谱图
2 波长重复性检验
重复使用同一波长,单色光实际波长的变动值小于等于0.5nm.
波长重复性是波长准确度的重复测量.在相同的测试条件下(温度、扫描速度、狭缝宽度等),每隔一定时间,对某一吸收光谱的缝位重复测量一次,然后求出测量值的相对标准偏差,该相对标准偏差的的平均值表示波长的重复性.
3透射比正确度的检查
通常用硫酸铜、硫酸钴铵溶液,不过最长用的还是***钾溶液.
具体操作:质量分数=0.006000%(即1000g溶液中含有***钾0.06000g) ***钾的0.001mol/L高***酸标准溶液.以0.001mol/L高***酸为参比,以1cm的石英比色皿分别 235nm,257nm,313nm,350nm波长处测定透射比,与表一标准溶液的标准值进行比较,其差值在0.8%~2.5%之内.(指标对老仪器而言)
表1 W(K2CrO7)=0.006000% K2CrO7 溶液的透射比(25℃)
波长/nm 235 257 313 350
透射比 18.2 13.7 51.3 22.9
4稳定度的检查
在光电管不受光的条件下,用零点调节器将仪器调至零点,观察3min,读取透射比的变化,即为零点稳定度
在仪器测量波长范围的两端向中间靠10nm处,例如仪器工作波长范围为
200~800nm,则在210nm和790nm处,调零点后,盖上样品室盖,使光电管受光,调节透射比为95%(数显仪器调至100%)观察3min,读取透射比的变化即为光电流稳定度.
5分辨率
5.1单色器分辨率的测试
单色器分辨率表示刚能分辨相邻两条吸收谱带的能力,它是狭缝宽度和单色器色散率的函数.
5.2测试
光栅和出射狭缝的特性,以及光栅和出射狭缝的安排决定了仪器的分辨率。所谓的分辨率表示一个仪器分辨不同波长光的能力。例如,仪器是否真正能区分 500 nm 和 501 nm 或 502 nm。要区分两个不同的波长的光,关键是仪器的分辨率必须小于两个波长之差的十分之一。因此,要检测 260 和 280 nm 光的差别,仪器的分辨率至少是 2 nm。要区分 500 和 501 nm,仪器的分辨率必须是 0.1 nm。某些色散型分光光度计分辨率是固定的,而有些仪器分辨率则是可以选择的。很显然,可选择分辨率的仪器最大分辨率可达到
0.1 nm,结构当然较复杂,价格也较贵,但是其性能要优于固定 2 nm 带通的仪器。
具体操作:用氘灯为光源,仪器狭缝小于0.2nm时,氘灯在486.2和656.1nm的谱带宽度小于0.2nm.(当然也可以用氢灯,波长在486.13nm和686.28nm处) 6 吸光度校正
6.1吸光度准确度
实际测量的吸光度和其真值之差.
6.2吸光度重复性测试
吸光度重复性是指在相同的测量条件下,对同一标准样品进行重复多次的吸光度测量,所求得的相对标准偏差.
6.3测试
用于校正仪器吸光度的材料应该是纯度高,透光率比较稳定的物质,主要是铬酸钾(在碱性溶液中),***钾,***钾(在酸性溶液中).
***钾的0.005mol/L硫酸溶液,最大吸收波长是257nm.自己配置比较麻烦,要中重量法连续稀释.现在一般都买标准溶液,如果买不了,找俺,给你配置的具体方法.
***钾的0.005mol/L的硫酸溶液的各个参数如表2
表2 ***钾的0.005mol/L的硫酸溶液的参 内容来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.
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