222动物细胞融合与单克隆抗体第二课时.ppt

222动物细胞融合与单克隆抗体第二课时
抗体的传统生产方法
从血清中分离抗体
该法制备抗体的特点：
产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。
多种效应B细胞
动物体内
多种抗体
抗原
单克隆抗体的222动物细胞融合与单克隆抗体第二课时
抗体的传统生产方法
从血清中分离抗体
该法制备抗体的特点：
产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。
多种效应B细胞
动物体内
多种抗体
抗原
单克隆抗体的制备
单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一,特异性强的抗体
利用效应B细胞产生抗体的功能
利用肿瘤细胞无限增殖的特性
利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞
利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞
设计方案：
单克隆抗体的制备过程
杂交 细胞
灭活的病毒等手段
小鼠骨髓瘤细胞
B淋巴细胞
经免疫的小鼠
提取
杂交瘤细胞
第一次筛选
用特定的选
择性培养基
第二次筛选
能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞
体外培养
注射到小鼠腹腔
提取单克隆抗体
整个制备过程为何要经过两次筛选？
①第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），在特定的选择性培养基上,未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。
②第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。
植物体细胞杂交
动物细胞融合(单克隆抗体的制备)
过程
第一步
原生质体的制备(酶解法)
正常小鼠免疫处理
第二步
原生质体的融合(物、化法)
动物细胞的融合(物、化、生法)
第三步
杂种细胞的筛选与培养
杂交瘤细胞的筛选与培养
第四步
杂种植株的诱导与鉴定
单克隆抗体的提纯
意义和用途
(1)克服远源杂交不亲和的障碍，大大扩展了杂交的亲本组合范围
(2)克服有性杂交的母系遗传现象，获得细胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传
(1)制备单克隆抗体等
(2)诊断、治疗、预防疾病
三、单克隆抗体的应用
（1）作为诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）
（2）运载药物
生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）
(“生物导弹” —单抗导向，药物为弹头)
B
体外培养
骨髓瘤细胞
杂交瘤细胞
足够数量的细胞群
注射到
小鼠腹腔
A
C
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案
2、该方案能达到预期效果吗？为什么？
4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。
1、该实验方案的目的是__________
3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______
5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。
制备单克隆抗体
B细胞
抗体
细胞融合
灭活病毒
双亲细胞
分泌抗体
无限增殖
原代
传代
50
例1：
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） 　

A
巩固练****br/>，正确的是（ ）
诱导融合的方法完全相同
C. 操作步骤基本相同 D. 都能形成杂种细胞
D
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ）