常用中药的生物鉴定.ppt

常用中药的生物鉴定
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常用中药的生物鉴定方法
免疫鉴定法
电泳鉴定法
生物效价鉴定法
单纯指标鉴定法
细胞生物学鉴定法
DNA遗传标记鉴定法
mRNA差异显022年，5月20日，20点35分，星期三
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2x106
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优点:
need very small amount of sample
缺点:
amplified product may be contaminated with other samples not related to the one
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Factors affect to PCR
Mg +2 concentration,
Mg +2  specificity 
~5mmol/L Mg+2 预实验
Primer(引物) specificity
Degenerate primer ---to find the target gene in the closely related species
specificity , nonspecific products 
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Annealing Temperature
Too high no PCR product
Too low much nonspecific product
gradient Temp PCR machine
find the suitable Temp
Taq polymerase quality
Template(模板) DNA quality
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PCR产物鉴定
Agarose gel electrophoresis to check product
% Agarose in TAE buffer (17 ml)
boil
Pour into the tray
(assembled gel apparatus)
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After PCR amplification
Agarose gel electrophoresis to check product
% agarose in 17 ml TAE ( 4mm thick)
5 ul product add 1 ul 6X loading dye mix
1Kb marker ul
100 V run 25-30 min
EB stain 10 min(EB致癌物, 戴手套) ,
photograph
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Kb
10 gamma primer Mismatch 3 base
10 gamma primer complete match
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PCR的应用
genetically modification organism (GMO )检测转基因生物，找出特异的基因或片段
find specific gene or