免疫组化报告.docx

免疫组化报告
1：实验目的
检测食管鳞状细胞癌的组织情况。
2：实验方法
用免疫组化Envision法
3：使用的实验设备和药品
孵育箱，冰箱，微波炉，切片机，染缸，载玻片，盖玻片，显微镜
过氧化物酶，固定液（10%中性缓冲福免疫组化报告
1：实验目的
检测食管鳞状细胞癌的组织情况。
2：实验方法
用免疫组化Envision法
3：使用的实验设备和药品
孵育箱，冰箱，微波炉，切片机，染缸，载玻片，盖玻片，显微镜
过氧化物酶，固定液（10%中性缓冲福尔马林），4%的多聚甲醛磷酸缓冲液，双氧水，75%，85%，95%，100%的乙醇，***钾浓硫酸，蒸馏水，多聚左旋赖氨酸，PBS，中性树胶，DAB色液，苏木素，%HCL，二甲苯，石蜡
4：实验步骤
取材：在病变区，交接区，远离病变区取材
固定：在固定之前用PBS轻洗所取组织样品，然后将组织样品至于小烧杯中用4%多聚甲醛磷酸缓冲液（用量应是样品的5倍）浸润，固定10—20分钟后取出，自然干燥
（3）脱水： 用梯度乙醇溶液（75%，85%，95%，100%的乙醇）作为脱水剂 ，此步骤应在4摄氏度下进行。将梯度乙醇至于小烧杯中，然后放入组织样本放于冰箱内，时间依据组织样本大小而定，时间应充分。
（4）透明，此过程需在4摄氏度下进行。时间依据组织样本大小而定。
（5）浸蜡，温度不能高于60摄氏度，将组织样本取出后，放入低熔点软蜡中，时间依据组织样本大小而定。
（6）包埋，放入前确定组织各个面，所需的断面朝下。
（7）修块，不能把蜡边与组织边缘靠的太近或太远。
（8）切片， 把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片。厚度通常为5—7μm。切好的蜡带放入40℃左右的温水中将蜡片展平。
（9）捞片，烤片
将载玻片浸泡在***钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95%乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。
防脱片处理
将多聚左旋赖氨酸涂在载玻片上，厚薄依据组织大小而定。
（10）脱蜡
（11）水化，用梯度乙醇（依次为100%，95%，85%，75%的乙醇）水化
（12）染色，
a石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS（PH=)
冲洗三次,每次三分钟（3Ｘ3 '）。
b根据每一种抗体的要求，对组织进行相应 的修复。
c每张切片滴加一滴或50µl 3%H2O2 室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。
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