分光光度计使用注意事项剖析
分光光度计的使用
一.使用及维护
安装环境
温度要求:装在不受阳光直接曝晒的房间;最好装 仪器引起波长误差的原因大致如下:工作环境温度变化太大、单色器受震后引起色散元件移位、波长扫描系统机械零件磨损、仪器积尘太多使转动受阻、光谱记录纸受潮伸缩变形等.
3. 波长重复性
波长重复性是定性分析的重要因素,由于波长位置不能准确重复,就不能准确判定吸收峰的位置,甚至引起判断错误.
用一个已知样品吸收峰或灯的辉线作标准,,这些偏差的平均值就是此分光光度计的波长重复性.
引起波长重复性下降的原因与引起波长误差的原因相似,当然电子系统工作不稳定也是原因之-。
4. 谱带半宽度
谱带半宽度又称有效带宽,.
,必须使用谱带半宽度小的分光光度计,否则从出射狭缝来的光斑会超过样品池的宽度,而给测定带来误差.
分光光度计谱带半宽度不符合性能指标常常是由于单色器中狭缝系统或狭缝伺服系统的故障,应请专业人员协助修理。
5. 杂散光
杂散光是指由检测器接收到的任何由仪器单色器分离的光谱范围以外的辐射.
杂散光可以分成两种形式,,在不通过样品的情况下,、机械零件(包括吸收池或样品本身),.
第二种杂散光是指测定波长以外的偏离正常光路到达检测器的光线,通常由光学系统中的缺陷所引起,如不必要的反射面、光束孔径不匹配、灰尘的散射、光学元件表面被擦伤、不均匀色散等都会降低光线的单***,、零件加工不良、.
,偏离是正的,,偏离是负的、%,.
由于杂散光强度在边缘波段比较大,因此在波长小于220nm进行光谱扫描时,必须小心有无“假吸收峰",可是由于杂散光在短波时急剧增大,因而使原来逐渐增大的吸光度反而变小,就会出现不应有的“假吸收峰".
当被测定的波长的能量降低时,,单色器的透光度、光源强度和检测器的灵敏度都是比较低的,-可见分光光度计中应该先检查200-220nm、340nm处的杂散光.
,它对于边缘波长的光能是完全吸收的,,、,溶液截止的尖锐程度比固体好.
在测定杂散光时,.
分辨率是指仪器对于紧密相邻的峰可分辨的最小波长间隔,、强度及检测器的光谱灵敏度等是影响仪器分辨率的主要因素.
分辨率的实际测试方法有许多种,这些方法的原理都是观察可分辨的最小波长间隔,-些。测定条件选择不当(
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