T-SAIA 005-2021 绵羊痘和山羊痘荧光PCR检测方法.pdf

ICS

B 38
心机：可控温至 4 ℃，离心速度可达 13 000×g 以上。
普通冰箱：冷藏 2 ℃～8 ℃、冷冻－20 ℃。
超低温冰箱：可控温至-70 ℃以下。
全台变速组织研磨器。
单通道微量移液器：量程分别为 μL～10 μL、20 μL～200 μL、100 μL～1 000 μL。
电子天平：精度为 g。
涡旋振荡器。
1T/SAIA 005—2021


高压蒸汽灭菌器。
5 试剂
除非另有说明外，本标准所用检测试剂均为分析纯，实验室用水应符合 GB/T6682 三级水的标
准。
无水乙醇：室温放置。
75%乙醇：配制见附录 ，室温放置。
PBS：配制见附录 。
引物和 TaqMan 探针：引物名称和序列见附录 B。
阳性对照：市售山羊痘活疫苗株。
阴性对照：无山羊痘病毒感染的组织。
6 样品的采集、运输及处理
采样注意事项
采样及样品处理过程中应戴一次性手套，样品间不得交叉污染。
样品采集
病料样品采集
取发病活体羊的皮肤丘疹或病死剖检羊的肺、淋巴结等组织 5 g～10 g，装入一次性塑料袋或其
他灭菌容器，编号标记，置于样品冷藏箱送至实验室。在实验室生物安全柜内取出待检样品，加入
5 倍体积 4 ℃预冷的 PBS 中，充分研磨，4 ℃、3 000×g 离心 10 min，取上清液转入离心管中编号
备用。
细胞培养物
取 1 mL 细胞培养物置于离心管内，反复冻融 3 次，4 ℃、 3 000×g 离心 10 min，取上清液转
入离心管中编号备用。
疫苗样品
随机抽取山羊痘活疫苗样品 3 瓶，分别加入 2 mL 的 PBS，溶解，混匀，4 ℃、3 000×g 离心 10