miR-877-3p对骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力的影响.pdf

万方数据
郯净廴认焐綠啪ⅰ邪肌舢谽，—对骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力的影响⑧童徐．媪志骨质疏松症是以骨质丧失及骨破坏为特点的一类全身性疾病，严重影响人们的生活质量。该疾病与雌激素缺乏相关，尤其以绝经后女性高发‘“。骨髓间充质�����—��，使用许可证号为������—��。将小鼠在��抖�锓克茄��杂梢��安墒场�所有动物实验经重庆医科大学附属口腔医院伦理委员会批准���曷咨���号����．�饕J约良吧璞柑ヅＱG�������旌忌�铮�泄�；仪．��嘌�������国�皇凳庇ü釶����籺����试剂盒、��崛�试剂盒�����毡�；茜素红、胰蛋白酶���，美国�籆�一�约梁������，美国�怀芍�盏际�剂、成骨诱导试剂�俣魑��泄�；���“转染剂�����拦�；������掣煞�锐博，中国�����猚�觳庖�西门子，德国����实验方法骨质疏松模型及假手术模型建立手术在�∥�戊巴比妥钠麻醉下进行。将�只小鼠随机分为卵巢摘除术后骨质疏松症组��组，”��和假手术组���组，胛��。��樾∈笄谐�ú嗦殉玻瑂��榍谐��巢附近部分脂肪，分层缝合肌肉和皮肤层。���血清雌激素水平及骨参数检测术后�埽�∈�头部及眶周消毒后眼球取血，离心取血清，用酶联免疫试剂盒测定血清雌激素水平。术后�鲈拢�丫贝λ�组小鼠，多聚甲醛固定小鼠股骨�组小鼠骨参数，包括骨体积分数�����、骨小梁数量���������，�．�及骨密度��时，��。鼠股骨，在超净台内冰袋上去尽肌肉与筋膜，剪刀剪去股骨两端。注射器插入髓腔，将骨髓冲出，剪碎吹均成单细胞悬液，加入含��膁—��嘌�海���媾�养箱中常规培养。取状态较好的�代������煤����的��逑春笾匦��直鸺尤雜�一�������、��抗体，�姹芄���胄模��锨逡海�煤����的磷酸盐缓冲液������虢�清洗，重悬，流式细胞仪检测细胞表面抗原表达率。���晒怯盏技肮鄄���缢睾烊旧ü鄄烊���赴��凑�×��觯�孔密度接种于�装逯校�婧蠹尤氤晒怯盏家号嘌����灰骸Ｅ嘌���螅琍�清洗，多聚甲醛固定，���轻冲洗，去除多聚甲醛。茜素红染液染色，显微镜下拍照观察，利用分光光度仪检测吸光度�����。��钚粤姿崦�����色取�代细胞，按照���个／孔密度接种于�装逯校�随后加入成骨诱导液培养，每�洗，多聚甲醛固定，依照��觳馐约梁兴得鹘�蠥�染色，拍照观察，检测吸光度������芍�盏技肮鄄烊���赴��凑�×��觯�軱的密度接种于�装逯校�尤氤芍�盏家号嘌��用��崆岢逑矗�コ�嗑奂兹�Ｓ秃霴染色，显微镜下拍照观察，利用分光光度仪检测吸光度���测。提取�橄赴鸕�，按照试剂盒说明进行反转录及�����仉灯��一����．�ń玃�鶥��按照���个／孑�拿�度接种于�孔板，连续�每孔滴入�¨��一�海�糜��媾嘌�渲�后用酶联免疫检测机测量吸光度�����赴�剖�ń玃�鶥��按照���个／孑��密度接种于�孔板，连续��痢��．�表达检测代���琍�清洗，参照试剂盒说明书提取总���反转录合成��。����—�上游引物为�动物�����∈螅�河谥��籱��—�扫描检测��������，��������珹����灰海�嘌����清每��螅琍�清洗，多聚甲醛固定，再��掠我�镂��辉隆扮囗壬嫌我�镂�’．�