特殊染色法.ppt

实验四特殊染色法
实验目的要求
了解抗酸染色法、芽胞染色法的原理
熟悉抗酸染色法、芽胞染色法的方法以及意义
实验材料与方法
材料:
菌种:卡介苗、枯草杆菌培养物
染液:抗酸染色液、芽胞染色液
其他:玻片、接种环、酒精灯
无菌生理盐水、显微镜等
方法:
细菌涂片的制作:涂片、干燥、固定
染色:抗酸染色法、芽胞染色法
油镜使用:观察染色结果并记录
(一)抗酸染色法
★抗酸性细菌如结核杆菌等分枝杆菌属细菌,细菌细胞壁有很多脂类物质,石碳酸复红加温染色后,其中的分枝菌酸与石碳酸复红结合成牢固的复合物,能够抵抗盐酸酒精的脱色,使菌体保留红色,故称抗酸染色法。
★其他非抗酸菌和组织细胞因不能抵抗盐酸酒精的脱色,被脱成无色,后经碱性美兰染色后染成兰。
1、原理
2、抗酸染色方法
染液组成:
石碳酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰染液
染色方法:
石碳酸复红
初染
3%盐酸酒精
脱色
碱性美兰
复染
加温染5分钟
1-2min
影响抗酸染色的关键步骤是脱色
冷却后水洗
水洗
水洗
干燥
1~3min
注意事项
1、加温染色时:在火焰上方保持一定高度,加热至出现蒸气(注意不能使染液沸腾),如此反复2~3次(约5min)。在加热过程中要防止将染液烘干,应及时添加染液。
2、脱色时:用3%盐酸酒精脱色,直到流下的液体无色为止,进行水洗。
3、抗酸染色结果及意义
结果:
红色--抗酸染色阳性菌
兰色--抗酸染色阴性菌
意义:
用于鉴定分枝杆菌属细菌以及某些放线菌
结核分枝杆菌(抗酸染色)
(二)芽胞染色法
★芽胞是细菌在不良的环境条件下形成的休眠体。细菌能否形成芽胞以及芽胞的形状、芽胞的位置、是否膨大等特征是鉴定细菌的重要依据之一。
由于芽胞壁厚,通透性差,不易着色。为了能使芽胞着色便于观察,特用芽胞染色法。
其基本原理是:用着***强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅可以进入菌体也可进入芽胞内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽胞一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽胞仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽胞囊被染成复染剂的颜色,使芽胞和菌体更易区别。
1、原理