猪流行性腹泻病毒膜蛋白和核蛋白抗原表位的鉴定.pdf

中国农业科学院学位论文猪流行性腹泻病毒膜蛋白和核蛋白抗原表位的鉴定向兽医传染病及其病原硕士研究生:张志榜申请学位类别:农学硕士究位:中国农业科学院研究生院哈尔滨兽医研究所密级::冯力研究员专业:预防兽医学研方生物学和分子免疫学培养单提交日期月
:篤
献姗\\‘\\.,、蕾盘
翩繇断帆圳年相,/日瓿独创性声明关于论文使用授权的声明研究生签名:狄丢榜研究生签名:欲志枵时间:.畂晗Σ本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。时间:本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
隡¨、“妨闸鐺,ⅰ癗蛋白第,。位是“淑颍豢筃蛋白同源性分析显示,鞍妆砦弧觯琑舶’和鞍妆砦弧ぁ軲眦笔歉叨缺J‘啊‘.分别是摘要分别以纯化的重组蛋白伽蚇庖連痗、鼠,通过常规杂交瘤技术获得一株稳。间接免疫荧光试验~砻、钮均对接种的匝橄允究筂蛋白试验证明鞍妆砦Ⅳ‰猪流行性腹泻怯芍砹餍行愿剐翰《琍引起的猪的肠道传染病,其主要特征是严重的肠炎、呕吐、腹泻及脱水。该病在世界范围内广泛分布,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究通过分别克隆了/甑腗蛋白和鞍椎幕颍⒖寺〉载体进行测序。测序验证无误后,以构建的重组质粒为模板,┰鼋囟的,并克隆到原核表达载体蚿上,构建重组质粒和淮庸菇ǖ闹刈橹柿辖玁基因切下来并连接到原核表达载体希菇ㄖ刈橹柿。分别将这三种重组质粒转化感受态细胞时,,表达的鞍缀蚇蛋白的分子量大小分别约为:匝橹っ髦刈榈鞍譼瓾蚇苡胪每筆粜匝G宸⑸从Α定分泌抗鞍卓固宓脑咏涣鱿赴腿晡榷ǚ置诳筃蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为;、蛋白亚类为崃次猯籒蛋白亚类均为,轻链均为细胞产生特异的免疫荧光。能识别天然的鞍祝挚筃蛋白的均不与天然的鞍追从Α通过对鞍缀蚇蛋白进行一系列的截短表达,初步确定抗鞍譓攵缘目乖、攵缘目乖砦环直鹗为了精确确定鞍缀蚇蛋白的抗原表位,本研究从已经初步鉴定出的表位序列的撕酥鸶鋈コ被崂慈范ǹ乖砦坏暮诵陌被帷=峁砻、侗鸬谋砦坏暮诵男蛄小的,鞍妆砦弧虮冉媳J亍可以被猪抗阳性血清识别,而不与猪抗阳性血清反应。本研究确定了鞍缀蚇蛋白上的抗原表位,为进一步阐明鞍缀蚇蛋白的抗原结构及设计表位疫苗和鉴别诊断方法提供了有用信息。关键词:猪流行性腹泻病毒,鞍祝琋蛋白,乖砦
“,“姗∽Ⅵ.甤,.璕瘢,...瑃一.,·~甌/⑽鰉,瑀甐,,.
鹀呵“痺癱畇
目录第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.母攀觥.≡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.⊙⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。抗原表位研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.赴乖砦谎芯糠椒ā研究目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第二章鞍缀蚇蛋白的原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.《局辍⒕旨爸柿!.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯~⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯培养及崛鞍缀蚇蛋白表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯:⋯鞍缀蚇蛋白的原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..鞍缀蚇蛋白的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.刈榈鞍椎腤分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.
蚝蚇基因的扩增⋯