shRNA介导RNA干扰对SW480细胞原癌基因Pokemon的抑制作用探究.pdf

山西医科大学
硕士学位论文
shRNA介导RNA干扰对SW480细胞原癌基因Pokemon的抑制作用研
究
姓名:李喜霞
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:郭睿
20090518
榈糝干扰对赴原癌基因囊种谱饔醚芯中文摘要方法:结果:目的:检测蛟诮嶂背Π┳橹蚐细胞中的表达情况;构建基因的抑制,以期进一步探讨蛟谥琢龇⑸讨械姆肿踊撇⒀罢抑琢龌τ冒攵縍际跫觳釶相对表达量;利用免疫组织化学染色显示鞍自诮嶂背Π┘岸哉兆橹械菇ò邢蛞种芇原癌基因的短发夹双链的真核表达载体τ冒攵縍际跹橹在赴械谋泶锪浚焕眉浣免疫荧光技术观察鞍自赟细胞中的表达和定位;ü侍褰榈甲H維细胞,镜下观察转染效率和细胞形态的变化;应用实时荧分别从和蛋白水平检澳泶镌靥宥訮基扇旁靥澹魇较赴醴治鯬干扰载体转染后赴牡蛲霰浠定位在癌细胞胞质与胞核中,以胞质为主,阳性表达率为%;=嶂背Π┳橹鞍椎难粜员泶锫氏灾哂诎┡宰橹,;盖屑ê虳序列分析表明泶镌靥骞菇ǔ晒Γ结果显示鞍自赟细胞中主要定位在胞质中,胞核内也偶有表达;笞H拘蚀笤嘉ィ胍跣远哉兆橄啾龋扇抛镾细胞生长干扰载体,瞬时转染赴允迪謘表达载体对赴鸓原癌治疗的新靶点。在例结直肠癌及癌旁对照组织中的表达和定位;光定量蚖因的抑制情况,并筛选获得发挥最佳抑制效果的嶂背Π┳┡;间接免疫荧光彩弊H受抑,形态发生明显变化。实时荧光定量治霰砻鳎河胍跣远哉兆橄啾龋H泶镌靥搴水平均受到明显抑制,山西医科大学硕士学位论文
结论:关键词:籖干扰;其中干扰质粒的抑制效率最高,在訮蛋白的表达均有明显抑制,在魇较赴欠治鱿允咀H綪原癌基因诮嶂背Π┲懈弑泶铮芸赡苡虢嶂背Π┑姆⑸⒎⒄姑芮邢喙亍成功构建的甈干扰载体对赴蠵有显著抑制效果,虺聊纱俳鳶细胞凋亡增加。这些结果为后续进一步研究蛟诮嶂背Π┓⒉』浦械淖饔玫於饲捌谑笛榛笨纱%;结果显示:干扰质粒在转染后囊种坡首罡撸纱ィ泶镏柿:骃细胞凋亡增加。和蛋白表达具唤嶂背Π山西医科大学硕士学位论文
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插图、附表清单山西医科人学硕士学位论文
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日期:辍辉日年胰年—笪月—生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书本人李晓寒声明,所呈交的学位论文系在导师覃秀桃教授指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表现谢本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果:⒔换匮J谟璧难恢な椋⒀?稍谙喙孛教迳隙宰髡弑救说男形=型ūǎ⒈救税凑昭9娑ǖ姆绞剑砸虿坏比〉醚桓T斐傻拿鸷Γ泄ǹ⒈救烁涸鹨蚵畚某晒皇挡姆删婪住本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑旧鞯陌嫒ü樯轿饕娇拼笱校淳砜桑魏蔚ノ患案鋈瞬坏蒙米允褂意。道歉。论文作者签名:仍为山西医科大学。指导教师签名:日期:
前言包括结肠癌和直肠癌,是目前严重威胁人类健康的一个全球性问题。据统计,自年以来结直肠癌发生率在全球范围内呈现逐年上升趋势【浚每年有蛐路⒉±蛩劳霾±谖鞣骄梅⒋锕业木用穸裥灾琢鏊酪蛑校大肠癌位居第二,仅次于肺癌【】。近年来随着我国人民饮食结构的变化,大肠癌在我国的发病率和死亡率也呈上升趋势,位居恶性肿瘤死因的第四位,且有明显的发病年轻化趋势可达%,但目前因缺乏有效的早期诊断标准及抗肿瘤、抗转移治疗靶点,导致早期检出率低,确诊时%病例已属中晚期,肿瘤已经发生了局部或远处器官的转移,失去了最佳的治疗时机。手术的根治性差,生存率明显降低,术后晟媛什蛔。因此探寻大肠癌的早期防治手段已成为世纪临床肿瘤医学重要的研究课题。目前认为大肠癌的形成和发展是由多基因参与并受多因素影响的复杂过程。随着肿瘤分子生物学研究的深入,越来越