昆虫杆状病毒表达系统中阳性重组病毒的筛选.pdf.pdf

维普资讯
。
生物化学与生物物理进展... ..
. ,;:
:王等著,:北京

大学出崾杜,;
—
. ,:
·
.—.

,
】.
.
, ,
,,—
, ,—
,

..
一
昆虫杆状病毒表达系统中阳性重组病毒的筛选
—墼至望/々义鹏
&
,从过
去的经验性的一/
,由于重组率是如此之高,
有些方法可以免去繁琐的空斑选择,,
井指出各自的优缺点.
关键词型童’差三誊’兰里室苎,
自从年等“
毒表达系统表达干扰素以来,杆状病毒表达启动子下蝣,再和野生型共转
系统取得了丰富的成果,到目前为止已表达了染昆虫细胞,通过两侧同源边界区在体内发生
数以百计的各种生物活性分子因为其表达量同源重组,使多角体蛋白基因被外源基因取
大,后加工系统完备,使用安全等特点而备受代,而将外源基因整合到病毒基因组的相应位
,不能形成多角体,
定的经验,对非病毒学工作者来说费时费力, 这种表型在进行常规空斑测定时可以和野生型
在使用上受到一定限制. 的具有多角体的病毒空斑区别开来,这就是最
杆状病毒由于基因组庞大,外源基因的克初的筛选重组病毒的方式..但由于重组比
隆不能通过酶切连接的方式直接插入,而必须例低, ,/ ,表型差别不显
,
.
的质粒中,消除其编码区和不合适的酶切位点.
保留其端对高效表达必须的调控区,并在其
下游引入合适的酶切位点供外源基因的插入’收稿日期:—,俸回日期——
●
维普资讯
。’生物化学与生物物理进展..
组.
半乳糖苷酶
设备的限制.
年,等人在基因上游,
线型化技术
利用基因启动子带动基因构建了转
移载体,共转染细胞后,由于重年提出了线型化技术,其原
组病毒可以表达半乳糖苷酶,在进行空斑测理是线型化的杆状病毒基因组感染性很低,但
定时加入—而形成蓝色空斑便于重组病毒仍具有与引入细胞内的同源序列进行同源重组
, 的能力,如果同源序列位于线型化杆状病毒的
它利用果蝇热休克蛋白基因启动子控制两端,则基因组即可环化恢复完整的感染性.
筛选重组病毒,并用这个转移载体表达了上没有切点,将人工合成的含

局限性在于:.有假阳性,实验中筮现相当数中,然后和野生型共转染细胞,得
量的病毒表型为蓝色空斑,但其多角体蛋白基到含有单一切点的.. 将