血浆微量蛋白的测定及临床意义课件.ppt

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一、血浆蛋白质测定方法的进展
比色法:如总蛋白的测定方法:双缩脲反应法;白蛋白的测定方法:溴甲酚绿法。
电泳法:是进一步分离蛋白质的方法。
免疫测定法:是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的分析方法。
二、免疫测定法的特点
特异性好:即某一抗原只与其相应的抗体起反应。
敏感性高:可检测出纳克(ng)水平的量
三、免疫浊度法的分类及原理
透射免疫比浊法
散射免疫比浊法。
透射免疫比浊法的原理
当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时,被形成的免疫复合物反射、遮挡或吸收而减弱。在一定范围内,吸光度(A)与IC量呈正相关。因此当抗体量固定时,根据吸光度可计算出抗原量。要求形成的IC达到一定的数量,而且分子颗粒较大,否则难以精确测定,因此检测灵敏度相对较低。
散射免疫比浊法的原理
光线通过检测溶液时,被反应形成的抗原抗体复合物折射而部分偏转,产生散射光,散射光强度(I)与样本的IC量、散射夹角(θ)成正比,而与入射光波长成反比。
滤光器
光源
散射法检测器
透射法检测器
反应杯
四、免疫比浊分析的影响因素
抗原抗体的比例:抗原抗体的比例是浊度形成的关键因素。免疫比浊法的基本条件是在保持抗体过剩的情况下测定加入的抗原。但抗体过剩又必须适量。一般原则是先确定某一被测物的正常值,以±50%作为检测范围,抗体在此范围内应保持过剩。
抗体的质量:要求抗体有很强的特异性,有较高的效价,以及有高的亲和力。一般采用R型抗体。
反应溶液:。
增浊剂的作用:一般使用浓度为3%-4%的PEG6000
抗原过剩识别
在抗体量一定的情况下,免疫复合物生成量随着抗原量的增加而增多,但抗原量超过一定域值后,免疫复合物的量却随之减少,影响检测的准确性。
速率峰
过剩抗体峰
ARRAY360的抗原过剩检测