微生物学显微镜直接计数法课件.ppt

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一、实验目的:
掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计数的方法
了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应用
二、实验原理
常用的微生物细胞数目的检测法
血球计数板法
平板菌落计数法
干重法
比浊法等
比浊法
在一定范围内,菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比,即与吸光值成正比,菌数越多,吸光值越大。因此,借助于分光光度计,在一定波长下测定菌悬液的光密度,就可反应出菌液的浓度。该法适合测定大量的细胞。
显微镜直接计数法
利用血球计数板在显微镜下计数是常用的一种微生物计数法
优点:直观、快速
缺点:误差较大,不适合细菌计数(太小)
其原理与计数板的构造有关
每块计数板上有两个计数室(正方形),盖上盖玻片后容积是一定的(),,边长为1mm,其上面有精确的刻度。
其刻度一般有两种规格
16个中方格,每个中方格分25个小格16×25
25个中方格,每个中方格分16个小格25×16
计数室
三实验器材

酵母(Saccharomycescerevisiae)菌悬液(已稀释100倍)

显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。

将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片,再用细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点一小滴(不宜过多),让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室,一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。
注意事项
1、加样时先摇匀菌液,计数室中不可有气泡产生;
2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。
3、计数时,格线上的菌体只数上方和右边线上的;
4、如遇酵母出芽,芽体大小达到母细胞的一半时,作为两个菌体计算;
5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗,直到洗净为止。
6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。