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《药物色谱剖析》复****要点
第三章气相色谱法
认识气相色谱法的特色及分类;
特色:1、效能高2、敏捷度高3、选择性高4、剖析速度快5、应用范围广,测定高温下可气化的物质6、样品用量少
分类:1、按固定相分:气-固、气-液
、按柱子分:填补柱、毛细管柱
、按分别体制分:吸附、分派
气相色谱的固定液
(1)对固定液的要求
1、热稳固性好,在柱温下不热解,
2、化学惰性,不该与样品组分、担体、柱资料及载气发生不行逆反响。
3、蒸气压低,,不然固定液易流失,影响柱使用寿命、
保存时间及检测器响应。
4、对样品组分有必定的溶解度,不然样品组分不被保存而得不到分别。
5、对样品组分拥有选择性,不一样的组分有不一样的分派系数,以利分别。
6、对担体有润湿性,以利于在担体表面形成均匀液膜,以增添柱效。
(2)样品组分与固定液之间的分子作使劲的种类
1、定向力:由极性分子的永远偶极间的静电作用形成的。如极性组分与强极性固定液PEG-20M等的作使劲。
2、引诱力:在极性分子的永远偶极的电场作用下,周边的可极化的非极性分子可产生引诱
偶极,因此两分子间产生互相作使劲,这种作使劲往常较小。
3、色散力:非极性分子因为原子核和电子的运动,产生瞬时偶极,因此产生互相作用,这
种力广泛存在,但非极性分子间的作使劲仅仅一种。此作使劲更弱。
4、特别作使劲:主要根源于组分与固定液形成络合物。比如含有Ag+的固定液与烯烃可形
成络合物。
(3)固定液的极性与分别特征评论,主要掌握

Rohrschneider

常数,认识

McReynolds

常
数
组分的构造、性质与固定液相像时,在固定相中的溶解度大,因此保存时间长;反之,溶解度小,保存时间短。
Rohrschneider(罗胥耐得)提出了一种固定相极性的分类法:规定非极性固定液角鲨
烷的相对极性为0,强极性固定液β,β’-氧二丙***的极性为100,其余固定液的极性按下式计算:
100100q1qxq1q2
为丁二烯和正丁烷在固定液上的相对保存值之比的对数,即:
tR('
丁二烯)
qlg'
tR(正丁烷)q1、q2、qx
分别为待测物在氧二丙***、角鲨烷及欲测固定液上的
q
按这一方法测出的相对极性,从0至100分为五级,每20为一级,用“+”表示。
按上述方法不可以反应出样品组分与固定液之间的所有互相作使劲,不过反应了色散力和
引诱力。
McReynolds改良了罗氏的方法,采纳以下十种化合物作为检测物:
麦氏常数△I的计算公式以下:
IIpIa
Ip为某组分在待测固定液上的保存指数,
Ia为同一组分在角鲨烷上的保存指数,
一种固定液在规定的十种组分上测得的各个△
I值,表现了组分与固定液间的色散力、
引诱力、定向力与氢键力。因此比较全面地反应了该固定液的分别特征。
结论:
1、当固定液品种不一样,但△I值均几乎同样时,它们的分别特征也几乎同样,如SE-30,OV-1,OV-101,DC-410,SE-96。
2、当固定液之间的△I值靠近时,它们的分别特征也靠近,如DC710与OV-17。
3、当固定液间的△I值差异大时,它们的分别特征也有很大差异。
4)固定液的分类,掌握几种常有常有固定液如聚二***硅氧烷类、聚苯基***硅氧烷类、***烷基聚硅氧烷类和聚乙二醇的特色及使用剖析对象,特别是一些商品代码所表示的对应
的固定液名称。
常用:
1、***硅***(又称***聚硅氧烷)
***硅***SE-30,OV-1是最常用的固定液,极性很弱,与组分的互相作使劲主假如色
散力,对含氧化合物有必定的选择性。关于烃类等非极性化合物基本上按沸点次序分别。
2、苯基***硅***
按苯基含量的不一样,有低苯基(含苯基25%),中苯基(含苯基50%)及高苯基硅***之分。
OV-17属中苯基硅***。此类固定液合适于分别甾体化合物、生物碱、醇类、糖类等化合物。
3、***烷基硅***
XE-60、OV-225
这种固定液含有电负性的***基,对极性组分有较强的定向力,对易极化组分可使之产生
引诱偶极。合用于分别糖类、醇类、酚类、甾体化合物、脂肪酸等。
4、***烷基硅***
QF-1含三***丙基,对硝基化合物和***类有明显的选择性保存。而对芳烃和醇类则否。
关于***-芳烃,***-醇能很好地分别。
5、聚乙二醇
PEG20M、PEG6000、PEG400
这种固定液含有醚基及羟基,是氢键型固定液。在氢键的形成中,既是氢键的质子接受
体又是质子赐予体。它们能与羟基化合物、碱性含氮化合物、***类等形成氢键。组分在这种
固定液上的保存主要取决于氢键力的大小。合适于分别醇类、醛类、脂肪酸类、酚类、生物碱、酯类等化合物。
6、聚酯
DEGA、DEGS等为线性脂肪族聚酯,酯基中的氧原子有未用电子对,有亲核性,能与带部
分正电荷的氢形成氢键。此外,因为引诱效应(酯基的),存在着α开朗氢原子,所以有亲电性,对烯烃、芳烃、杂环化合物有较大的作使劲。合用于分别醇类、酚类、脂肪酸类、酯类、***类等化合物。
(5)气相色谱中怎样选择固定液
1、相像相溶:分别极性大的组分,则采纳极性大的固定液。分别非极性的组分,则可采纳
非极性或弱极性固定液。不论采纳非极性或极性固定液,一般沸点小的先出峰(对同系物而言)
2、若样品中的待测成分一个是极性组分,另一个是非极性组分,则采纳极性固定液比非极性固定液有益。
3、若样品中的待测组分简单形成氢键,则采纳氢键型固定液(如PEG-20M)较为有益。
4、混淆固定液:混淆固定液的保存值拥有加和性。所以,在同一条件下分别测出被分别组
分在单调固定液柱上的调整保存时间(tR')后,可用图解法求出混淆固定液的最正确配比。
(6)担体
一、担体的作用是支持固定液,使成均匀薄膜,以利气液均衡。有以下要求
1、颗粒均匀2、比表面积大3、化学惰性4、热稳固性好5、机械强度好
药物剖析中常用担体为硅藻土担体。
红色担体:天然硅藻土烧结而成,含氧化铁而成红色,构造密切,机械强度好,表面有氢键
及酸碱活性作用点。主要用于非极性固定液(样品)。
白色担体:硅藻土+助熔剂(Na2SO4)煅烧而成,此中氧化铁变为无色的铁硅酸钠配合物。
构造松散,机械强度较前者差,易碎而产生结粉,极性中心较红色担体少。
二、担体的表面办理:酸洗、碱洗、釉化、硅烷化
酸洗法:酸洗—水洗—烘干—硅烷化
目的:除掉担体表面的铁等金属氧化物杂质。酸洗担体主要用于分别酸和酯类化合物。
三、釉化目的:釉化能够拥塞担体表面的微孔、改良表面性质、障蔽或惰化担体表面的活性中心,增添机械强度,用于分别醇、和酸类极性强的物质,甲酸和甲醇会不行逆吸附,非极性物质柱效低。
(7)色谱柱的制备
过程:固定液的涂布—柱管预办理—柱子填装及老化
老化的目的:除掉填猜中节余溶剂及固定液中带来的低分子聚合物。
8)填补柱操作条件的选择载气:
GC中的载气有氮气、氦气、氩气、氢气。
FID检测器时:普氮。
ECD检测器时:高纯氮、氦气。
TCD检测器时:氢气及氦气均可达到较高敏捷度。
MSD检测器时:氦气。
温度:
1、检测器温度起码比柱温高30℃。以防柱中流出物在检测器上凝固,污染检测器。
2、柱温起码比固定液的最高使用温度低30℃。以防固定液流失。
3、柱温降低,保存时间延伸,容量因子增添,分别可获取改良。
4、气化室温度一般与检测器温度同样,若待测物不稳固,则气化室温度应设低一点。
5、柱温一般比样品中各组分均匀沸点略微低一些。
3、气-液色谱柱气相色谱法
1)气-液色谱柱气相色谱法中对担体的要求;
2)使用前担体的表面办理的原由及方法,此中担体表面办理时釉化的目的是什么?
3)认识填补柱的制备过程,掌握填补柱的老化的目的、方法及注意事项。
4)掌握填补柱气相色谱条件的选择,要点是载气和温度的选择。
气-固色谱与气-液色谱的特色比较
毛毛细细管管柱气气相相色色谱法法
1)掌握毛细管气相色谱仪的流程表示图(P47图3-6,会画出主要流程和标出主要零件)(1)掌握毛细管气相色谱仪的流程表示图(P47图3-6,会画出主要流程和标出主要零件)
1)毛细管柱的柱管使用聚酰亚***涂层的原由及作用。
2)交联毛细管柱的特色及常用交联方法,毛细管气相色谱柱交联引起剂主要有哪些?
3)毛细管柱进样方式,掌握分流及吹尾气目的。
4)分流比及测定方法;线性分流与非线性分流及影响样品失真的要素。
5)分流进样法的优弊端。
FID

火焰离子化检测器

第四章
是以氢气在空气

气相色谱检测器
(或氧气)中焚烧生成的火焰为能源

,

因此得名。为
通用型检测器。
原理:往常在发射极上加+150V~300V的电压,则在喷口周边形成一个电场。来自色谱柱的载
气与氢气与氧气混淆后,自喷口流出,与空气相遇,为点火极(枪)所引燃。当样品组分出现
在载气中时,为氢火焰之高温所离子化,形成正离子和负离子(或电子)。在电场作用下,正
离子移向采集极,进而产生微电流信号,经微电流放大器放大,由记录仪记录下来。也可在极化极加负电压,则采集极采集为负离子流。
性能特色:对含碳有机物有很高敏捷度。线型范围宽,达107。检测器耐用,噪声小,基线稳固性好。死体积小,响应快。对温度变化不敏感。
ECD电子捕捉检测器
为选择型高敏捷度检测器,它对拥有高电负性的组分拥有高敏捷度。主要用于检测含卤素的有机物及含硝基的有机物。关于含氧、硫、氮、磷、金属的有机物也有信号。
原理:3H放射源的使用温度在220℃以下,63Ni放射源的使用温度350℃以下。放射源产生β射线,使载气解离,由阳极采集电子,形成稳固的基流。当电负性组分进入检测器,捕捉了电子,进而使基流降落,产生信号。
要求:载气纯度要高,不可以用普氮。载气需经脱氧办理,以提升敏捷度。
TCD热导检测器
原理:鉴于载气和样品的导热系数的差异,并用惠斯登电桥检测。
特色:为浓度型通用检测器。不损坏样品,可串连其余检测器。载气的热导系数与被测物的
热导系数相差越大,敏捷度越高。敏捷度H2>He>N2,故常用H2及He作载气。热敏元件的电阻值越大,敏捷度越高。热丝与池体的温度差值越大,越利于热传导,故采纳低的池体温度为好,但要以样品不被冷凝沾污池体为限。桥电流越大越敏捷,但不一样的载气和不一样的热敏元件有不一样的最高同意桥流,操作时要严格依照仪器说明书。一般H2作载气时用120~180mA,N2用80mA。
第五章

气相色谱有关技术
(Programmedtemperaturegaschromatography)是指在一个剖析周期
里,色谱柱温按预约的加热速度,随时间线性或非线性的增添,则混淆物中所有组分将在其
最正确柱温下贱优秀谱柱。
(1)特色:可使低沸点组分与高沸点组分同时获取检测;峰形尖利,提升检测敏捷度;省
时;较快的赶走柱中杂质峰,便于下一次剖析。
(2)主要方式及合用对象
方式:线性升温、非线性升温。线型-恒温加热、恒温-线性加热、恒温-线性-恒温加热、
多阶程序升温加热。
合用:在分别多个性质相差较大的待测组分时,用程序升温GC法来剖析样品。当柱温较低
时,低沸点组分最早流出并能获取优秀分别,跟着柱温的逐渐高升,高沸点组分逐一流出,
并能和低沸点组分同样也能获取优秀的尖峰
保存温度:在程序升温中,某同样品组分的浓度极大值流优秀谱柱时的柱温,称为该组分的
保存温度,以TR表示。
顶空气相色谱法是对液体或固体中的挥发性成分进行气相色谱剖析的一种间接测定法。特色:样品办理简单,取气相部分进行剖析,大大减少了样品基质关于剖析的扰乱。
顶空进样技术与气相色谱定量剖析相联合,能正确进行定量剖析。经过优化操作参数,提升敏捷度,可达到剖析测试的要求。
应用范围宽泛,合用于绝大部分挥发性气体的剖析。
分类:静态顶空气相色谱:均衡顶空气相色谱;动向顶空气相色谱:吹扫-捕集法
2)静态顶空剖析的原理及影响静态顶空气相色谱剖析的要素
将液体或固体样品置于一个恒温密闭的样品容器中,使此中的挥发性成分逸出,在达到气-液或气-固均衡后,采集蒸气相进行气相色谱剖析。其基本理论依照是在必定条件下气相和
凝集相(液相或固相)之间存在着分派均衡,所以气相的构成能反应凝集相的构成。经过测
定样品基质上方的气体成分来测定这些组分在原样品中的含量。
影响要素:样品的性质、分派常数和均衡温度、均衡时间、样品瓶、
(3)动向顶空剖析的原理及动向顶空法操作条件选择
把液体或许固体样品置于样品管中,向样品管中通入惰性气体(N2),将待测组分吹扫出来,
并使其经过装有吸附剂的捕集管,被吸附剂吸附,而后将吸附剂加热,使被测组分脱附,再用载气将脱附的样品气体带入气相色谱仪中进行剖析。
条件选择:样品吹扫温度、捕集器温度、连结收路的温度、吹扫流速、吹扫气的种类。
比较:
静态顶空:①仪器较简单,无需吸附装置②样品基质扰乱小③挥发性样品组分不会丢掉
④可连续取样剖析①敏捷度稍低②关于较高沸点的组分较难剖析
动向顶空:①可将挥发性组分所有萃拿出来,并在捕集装置浓缩后进行剖析②敏捷度较高③应用更宽泛,可剖析沸点较高的组分①样品基质可能扰乱剖析②吸附和解吸可能造成样品组分的丢掉
第六章GC在药物剖析中的应用

A、关于分子量小于500的药物,分子构造中不含拥有开朗氢的-OH,-NH2,-NH-,-COOH,
-SO3H,-SH,-NHR-,-CONH2,-CONH-,-SO2NH2,-SO2NH-等极性官能团,并且
对热稳固,一般均可采纳GC法进行剖析。
B、关于分子量小于200的小分子化合物,若分子构造中含有以下五种极性官能团:-OH,
NH2,-SH,-NHR,-CONH2,但分子构造中总的极性官能团数目不超出两个,并且对热稳固,则一般均可采纳GC法进行剖析。
C、分子量小于500的中等极性化合物常常能够直接进行GC剖析。如硝苯地平、尼莫地平、
尼群地平、尼索地同等地平类降压药、***、硝西泮等西泮类安息药。

含有羟基、羧基、氨基或酰***基等极性基团,糖类和氨基酸类化合物一般经衍生化后能够进
行气相色谱剖析。
目的:使难气化的待测物变为一种新的拥有必定挥发性的化合物,以适应GC分别的要求。
比如单糖的GC剖析。降低待测物的极性,减小拖尾和吸附,改良其色谱性能。比如经过衍
生化反响来关闭羧基等基团,以除去待测物的拖尾现象。使待测物在特定检测器上具备或提
高检测特征,以达到痕量剖析的目的。比如引入***原子,增添待测物的电子捕捉能力,提升
电子捕捉检测敏捷度等。如关附甲素的三***乙酰化。改变样品中被测组分或扰乱组分的理化
性质,以改良分别特征。在与其余仪器联用技术中(如GC-MS)利用各种衍生化反响以获取更
明确或特定的构造信息。
当待测物用GC法和HPLC法均可剖析时应怎样选择
因为HPLC法的进样正确度和精细度一般比GC法好,往常选择正确度和精细度较好的
法。
GC法例主要用于测定那些以没有紫外汲取的或紫外汲取很弱的挥发油类成分为主成分或辅

HPLC
料的药物制剂。
在化学药品、中成药、中药中间体和中药制品中的残留溶剂的检测方面一般采纳
为GC法中的FID和ECD检测器对残留溶剂的检测响应(敏捷度)要优于

GC法,因HPLC的检测器。
1、高效液相色谱仪的构成:流动相及贮液罐、高压输液泵及梯度洗脱装置、进样装置、色谱柱、检测器。
㈠高效液相色谱仪构成
流动相及贮液罐:~
4吸滤头2流动相脱气1低压脱气法2吹氮脱气法3超声波脱气法4真空脱气法
㈡高压输液泵及梯度洗脱装置
㈢进样装置:注射器进样,六通阀进样,自动进样器
2、高效液相色谱法与其余色谱法优弊端比较;
气相色谱法:只好剖析挥发性物质或高温可气化的物质、不合适于剖析热不稳固的物质、用
毛细管柱色谱可获取很高的柱效、载气不影响分派,一般靠改变固定相或色谱柱温度来改变选择性、流动相为气体,无毒、样品回收困难
经典液相色谱的比较:1高分别效能2快速,省时,省资料3敏捷度高,正确度高
气象色谱比较:1几乎能够剖析各样物质2适用与剖析热不稳固物质3色谱柱不如气象色谱
长,柱效不如气象色谱的毛细管高4固定相不如气相色谱柱种类众多,主要靠改变流动相来
改变选择性5流动相位有机溶剂,有毒6样品可定量回收,也可用于制备
4、液固吸附色谱法的保存规律和主要应用;
一液固吸附色谱法
㈠液固吸附色谱法的分别原理:色谱分别鉴于吸附效应的色谱法称为吸附色谱,以固
体吸附剂为固定相,以液体为流动相的色谱法称为液固吸附色谱法。当流动相流过固定相时,
样品组分分子与流动相分子竞争吸附剂表面活性吸附中心,样品中不一样组分也竞争吸附中心
㈡液固吸附色谱法的固定相:1表面拥有极性活性基团2形状适合且粒径散布均匀3
多孔性且比表面积较大,载样量大4化学性质稳固5机械强度高6价钱合理
㈢液固吸附色谱法的流动相:主要为有机溶剂(如己烷,庚烷),某些有机溶剂(如甲
醇,三乙***)作为缓冲剂加入此中以调理流动相的溶剂强度,极性及PH值。流动相极性越
大,洗脱越强,溶质保存越小。
二液液分派色谱
鉴于样品组分在固定液和流动相之间分派系数不一样而分别的色谱法叫液液分派色谱。
流动相极性小于固定相的叫正相液液色谱,流动相极性大于固定相的叫做反相液液色谱一般规律:
F化物<Cl化物<Br化物<I化物;
顺式几何异构体比反式几何异构体保存值大;
官能团之间的分子内氢键将使保存值减小;
极性基团旁边有宏大烷基存在时,保存值减小;
环己烷衍生物和甾体化合物的中位代替基比轴端代替基有更强的保存。
应用:异构体的分别、样品预办理、制备色谱
5、化学键合相色谱的特色、分类和主要制备程序;
一化学键合相的特色和分类
㈠特色;1与液液分派色谱对比,使用过程中固定相不流失,耐溶剂冲刷2与液固吸附
色谱对比,除去了担体上的表面活性作用特色,除去了某些可能的催化活性3表面改性灵巧,
简单获取重复性产品4化学性能稳固,耐受范围为PH2~85热稳固性好,一般在70℃一下
稳固6载样量大7梯度洗脱均衡快
㈡分类:1按键和相的表面构造:单分子键合和聚合键合2按键合有机硅烷的官能团:
极性键和相,非极性键和相和离子互换键和相
二固定相的制备与性能评论
制备:1所用的担体资料应有某种化学反响活性2有机分子应含有能与担体表面发生反
应的官能团
性能评论:1微量元素剖析或热失重法:本法直接测定键和相的碳含量,表示方法表
面键合官能团浓度,表面碳覆盖率,有机官能团的表面覆盖率2色谱法3光谱法
三非极性键合相
㈠疏溶剂作用理论:1分子毛:非极性烷基键合相是在硅胶表面蒙覆了一层以Si-C
键化学键合的十八烷基(或其余烃基)的分子毛2溶质分子:溶质分子=非极性部分+极性官
能团部分3疏溶剂效应:当溶质分子的非极性部分与极性溶剂接触式,互相间产生斥力叫做
“疏溶剂”。当键合相表面的烷基与极性溶剂接触时,互相间也产生斥力。当溶质分子的非
极性部分与键合相表面的烷基接触时,互相之间产生缔合作用。这种缔合是可逆的,其强弱
决定了溶质分子色谱保存的强弱。溶质分子的极性部分与极性溶剂拥有亲和力。4溶质保存
值的影响要素:溶质分子构造,烷基键合固定相特征,流动相性质,温度
㈡亲硅醇基效应:烷基键合相表面常常还有残留硅醇基,这是一种微量酸性的基团,
可与溶质阳离子或氢键基团互相作用。
㈢流动相的设计:1首选原则2多元溶剂3洗脱能力的选择4代替溶剂5离子克制色
谱法。
四非极性键合相填料的新进展
㈠空间保护键合相:因为在C18烷基侧链引入较大的官能团以及立体效应,阻挡了
硅烷鉴于剖析物的互相作用,他在PH=7时对碱性化合物的分别,表现对称峰形并有很好的
柱效,在低PH值时有较高水解稳固性
㈡双齿键合固定相:其环状构造不论在低PH值仍是高PH值条件下均显示了较高稳固
性,满意的柱效和色谱行为
㈢内嵌极性基团键合固定相:极性官能团嵌入键合相的技术是改良固定相和水溶液兼
容能力的一个门路,对碱性化合物显现出优秀的对称峰形,有时能够表现不一样的选择性。
㈣硅碳杂化硅胶:这种填料发挥了硅胶与聚合物基质填料的优势,为研究者优化分别
速度,分别度,PH选择性,色谱柱寿命及上样量供给了强有力的工具。
㈤其余:以氧化锆为基质的键和相,聚合物包覆法
将极性官能团键合到载体上,构成极性键和相。以极性键合相为固定相的色谱法称
作极性键和相色谱法。合用于分别极性和强极性的化合物。
六离子互换键合相
㈠分别机理:阳离子互换,阴离子互换
k'

㈡保存规律:1阴离子互换分别有机酸,阳离子互换分别有机碱2离子强度增添,
减少。原由是离子互换均衡的挪动3有机改性剂对保存的影响假如洗脱液中加入极性有
机组分则克制离子互换,并且产生按分派机理进行的分别。
6、非极性键合相色谱的保存体制和保存规律;
双保存机理:溶质的保存值应包含两部分的贡献,即疏溶剂效应和亲硅醇基效应。亲硅醇基效应:烷基键合相表面常常还有节余硅醇基,这是一种微量酸性的基团,可与溶质阳离子或氢键基团互相作用,主要影响含氮类药物的分别,造成色谱峰拖尾,柱效降落。
7、离子对色谱法的保存体制和应用;
在化学键合的有机硅烷分子中带上固定的离子互换基团,便成了离子互换键合相。
保存规律:
阴离子互换剂分别有机酸,pH越小,酸的解离被克制,保存越小。在用强阴离子互换键合相分别酸性药物时,pka值越小,保存时间↑
阳离子互换剂分别有机碱:在用强阳离子互换键合相分别碱性药物时,pH↑→游离碱↑→k’↓,保存时间↓。pH高,碱以分子形式存在,保存值很小。
8、分别极性化合物可供选择的主要分别模式;
9、分子排阻色谱法的分别原理;
剖析:多肽、蛋白质、多糖等生物大分子、高聚物。
原理:拥有不一样分子大小的样品经过柱时,溶质分子能够被柱填料的孔径分类。
10、超高效液相色谱分别的主要优势;
比HPLC更高的分别度、比

HPLC更高的剖析速度、比

HPLC更高的敏捷度、
应用:体内药物剖析、中药剖析、代谢组学剖析及其余一些生化领域

先导化合物的挑选

蛋
白质组学研究天然产物的剖析
第十章,手性高效液相色谱法
手性药物的定义(名词解说类);手性药物是指由拥有药理活性的手性化合物构成的药物,此中只含有效对映体或许以含有效的对映体为主。
手性衍生化试剂拆分原理及衍生化反响的要求(简答类);