家蚕THY超家族蛋白的表达功能分析和亚细胞定位分析.pdf

浙江理工大学
硕士学位论文
家蚕THY超家族蛋白的表达功能分析和亚细胞定位研究
姓名:张昌戎
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张耀洲
20090301
家蚕易宓鞍椎谋泶锕δ芊治鲇胙窍赴ㄎ谎芯要摘我们从本实验室构建的家蚕蛹文库中发现了一条序列登录号为眯蛄惺怯个外显子,瞿诤蛹艚佣伞P蛄斜榷院发现其,编码霭被岵谢=撇獾陌被嵝蛄薪型性榷裕⑾执说鞍仔蛄泻辛礁鯰保守结构域,属保守假定蛋白,因此将其命名为镄畔⒀гげ馄浞肿恿课,我们利用大肠杆菌表达系统成功表达了含有昵┑腂融合蛋白,饕R钥扇苄问酱嬖谟谏锨逯校肗亲和层析柱纯化融合的目的蛋白,经反相柱层析进一步纯化,确性。用得到的纯化融合蛋白为抗原免疫新西兰白兔,制备该融合蛋白的多克隆检测发现,鞍自诩也衔辶溆壮孀橹的卵巢,头,皮均有表达,在蛹和蛾的发育阶段有表达。荧光定量慕峁明,家蚕诩也系母鞲龇⒂逼诩安煌橹泄惴捍嬖冢渲性家蚕的各个发育时期中,蛾的表达量较高,卵的表达量较低;在五龄幼虫的头、卵巢、中肠、马氏管、气管、表皮、脂肪体,丝腺等组织中膍含量依次减少。用免疫荧光的方法对家蚕的赴醒窍赴ㄎ皇狈⑾郑鞍字饕4嬖谟谙赴酥校世锖拷仙佟4送馕颐腔褂肕的方法检测了融合蛋白訦蚐两种肿瘤细胞增殖的抑制活性,发现浓度为/的訦赴∈笔币种坡士纱锏ィ对赴蛎挥忻飨孕Ч等电点为预测分子量合计为进行质谱分析,得到该融合蛋白的分子量为.,证实了该蛋白表达的正抗体。觳飧每寡G多克隆抗体男Ъ劭纱锏:陨稀S弥票傅多克隆抗体进行关键词:家蚕;表达分析;谎窍赴ㄎ浙江理工大学硕士学位论文
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醐:≯刖帅学位论文作者签名:多娼莪浙江理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。浙江理工大学硕士学位论文
冢横的辏辉蚂日期:年学位论文作者签名:致岛衣不保密浙江理工大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于,在年解密后使用本版权书。指导教师签名:保密口浙江理工大学硕士学位论文
第一章易宓鞍籽芯拷舫易宓鞍资粲诒J氐募傧氲鞍祝歉菟堑腄序列推测出来的,,邛易逵凶沤细叩耐葱裕季哂蠾唇峁褂颍推测所编码的蛋白氨基酸大小在之间,都含有一个或两个约个氨基酸残基的假定保守的峁褂颍蠺保守结构域的蛋白功能目前尚不清楚,具有类似保守结构域的相关蛋白目前在上登录的只有种,分别存在于果蝇,埃及伊蚊,家蚕等昆虫物种当:辛礁鼋峁褂虻募俣ǖ鞍捉峁褂蚣湎两个峁褂蛑浣鱿喔粢桓霭被岵谢琓结构域在整个序列中的位置目前的信息仅表明易宓鞍椎慕峁褂蛴胍丫芯抗惴旱逍叵偎之间的同源性也较高纾喝酥械腡序列与家蚕中的峁褂蚯湫蛄型葱分别能达到为%和%,与果蝇中的假想蛋白腡结构域同源性为%6瓯ǖ赖墓行路⑾值暮琓保守区序列与相比,同源性都在%左右【。虽然它们的天然存在和结构功能尚且未知,但随着技术手段的进步,会有更多的相关序列会被发现,这对基因信息的分类和进化模式的探索都是有益族蛋白是目前研究较广的一种肌动蛋白结合蛋白【,通过其研究进展有助于我们开展家蚕易宓鞍坠δ芎徒峁沟奶教帧中发现含有两个峁褂颍诠兄环⑾忠桓觥王峁褂蛐蛄星鸵恍已知的蛋白序列具有较高的同源性,尤其是和家族这样的肌动蛋白结合蛋白。肌动蛋白是微丝的结构蛋白,以两种形式存在,即单体和多聚体。单体的肌动蛋白是由一条多肽链构成的球形分子,又称球状肌动蛋白產庑卫嗨苹ㄉ<《鞍椎亩嗑厶逍纬杉《鞍姿浚莆O宋醇《引言隔的氨基酸残基数目是不一样的,本课题所要研究的目的基因预测表达的蛋白,都接近中间和恕的。易宓鞍椎慕峁在目前发现的易宓鞍字校壳