持续性次氯酸消毒对内镜终末漂洗水的消毒效果 王萍.pdf

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20227217 Chin J Infect Control Vol 21 No 7 Jul 2022·716·
DOI:.1671-
消毒与感控专题论著
·
持续性次***酸消毒对内镜终末漂洗水的消毒效果
王萍1韩梦鸽2沈国锋3李娜4张鑫1潘玥玮1史庆丰2高晓东2孙伟2
,,, , ,,,,
复旦大学附属中山医院内镜中心上海复旦大学附属中山医院感染管理科上海复旦大学
(1., 200032;2., 200032;3.
附属闵行医院感染管理科上海复旦大学附属中山医院感染病科上海
, 201199;4., 200032)
摘要目的探讨持续性次***酸灌注对内镜终末漂洗水的消毒效果方法基线采集内镜终末漂洗水的水
[ ] 。
样,进行微生物培养和宏基因组二代测序鉴定。引入微酸性次***酸水发生机后,在安装后的特定时间收集水样进
行培养和宏基因组二代测序分析结果安装前共采集水样份其中份合格合格率为不合格水
。 27,10,%。
样可检出放线根瘤菌、嗜麦芽窄食单胞菌、黄色微杆菌、贪铜菌、藤泽***杆菌、少动鞘氨醇单胞菌等水源性细菌;
安装后共采集水样份均为合格宏基因组二代测序分析显示安装前的样本中可检测出大量皮氏罗尔斯顿
54,。,
菌、耐金属贪铜菌、奥斯陆莫拉菌、日本慢生根瘤菌、水生***杆菌、戈登分枝杆菌、新鞘氨醇杆菌等细菌序列,消毒
后主要为宏基因测序分析常见的背景细菌结论持续性次***酸灌注消毒可有效清除水管路中的细菌并降低水
。 ,
管路中生物膜的形成,提升内镜终末漂洗水的质量。
关键词次***酸持续性消毒内镜消毒宏基因组二代测序水源性细菌
[ ] ;;;;
中图分类号
[] R187+.2
Disinfection effect of persistent hypochlorous acid on final rinsing water
for endoscope
WANG Ping1,HAN Meng-ge2,SHEN Guo-feng3,LI Na4,ZHANG Xin1,PAN Yue-wei1,
SHI Qing-feng2,GAO Xiao-dong2,SUN Wei2( Center,Zhongshan Hospital,
Fudan University,Shanghai 200032,China; of Infection Management,Zhong-
shan Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China; of Infection Ma-
nagement,Minhang Hospital,Fudan University,Shanghai 201199,China; of
Infectious Diseases,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China)
[Abstract] Objective To discuss the disinfection effect of persistent hypochlorous acid supply to final rinse water
for Water specimens of final rinse water for endoscope were collected at baseline,and identi-
fied by microbial culture and metagenomic next-generation sequencing(mNGS).After introducing a slightly acidic
hypochlorous acid water generator,water specimens were collected at a specific time after installation for culture and
mNGS A total of 27 water specimens were collected before installation,and 10(%)were
bacteria such as Rhizobiumradiobacter,Stenotrophomonas maltophilia,Microbacterium fla-
vum,Cupriavidus,Methylobacterium fujisawaense and Sphingomonas paucimobilis can be detected in unqualified
water specimens,54 water specimens were collected after installation,and all of them were shows
that abundant sequences of Ralstonia Pichia,Cupriavidus metallidurans,Moraxella osloensis,Rhizobium japoni-
cum,Aquatic methylbacterium,Mycobacterium Gordon and Sphingosine neobacteriumcould be detected in water
specimens before installation,but only background bacteria in mNGS were found after
Persistent hypochlorous acid supply can effectively remove bacteria and reduce biofilm formation in water pipeline,
收稿日期
[] 2022-05-30
基金项目上海市科研计划项目
[] (19DZ2280100)
作者简介王萍女汉族江苏省南通市人副主任护师主要从事护理管理及内镜感染控制研究
[] (1962-),(),,,。
通信作者孙伟
[] E-mail:******@
书
中国感染控制杂志年月第卷第期
·816·20227217 Chin J Infect Control Vol 21 No 7 Jul 2022
improving the quality of final rinse water for endoscope.
[Key words] hypochlorous acid;persistent disinfection;endoscope disinfection;metagenomic next-generation
sequencing;aquatic bacteria
近年来随着内镜技术的发展及在临床中的广泛典年版标准无菌操作转移至琼脂培
,(2020)》R2A
应用软式内镜使用后的清洗和消毒流程越来越受到养平板置于培养箱培养
,,35℃5 d。
关注终末漂洗作为软式内镜清洗消毒后的最终处水路的改造和监测根据首次纯水监测结
。、
理过程若漂洗水中细菌含量长期过高极易造成消毒果于年月引入微酸性次***酸水发生机向
,,202112,
流程的失败,并导致内壁生物膜的缓慢形成。为此,纯化水管路中恒定输出次***酸,使纯化水中次***酸
软式内镜清洗消毒技术规范[]要求终浓度为在设备安装后的第
《》WS 507—2016110 mg/L。1、2、4、7、
软式内镜使用纯化水或无菌水进行终末漂洗并应天按照的方法进行采样培养和
,10、14、21、、
保证纯化水细菌总数然而国鉴定以及测序分析
≤10 CFU/100 mL。,,mNGS。
内研究[]指出自来水经过纯水制备系统后水中细细菌鉴定使用无菌接种环挑取培养阳性
2-3,
菌含量反而增高的现象,在新建内镜中心的水管路标本中典型、单个菌落涂抹至基质辅助激光解吸电
中尤为常见[]离飞行时间质谱仪样品检测板上
4。(MALID-TOF),
上海市三级医疗机构软式内镜终末漂洗尽管已随后滴加的***基羟基肉桂酸溶液覆盖
1μLα--4-,
经加装纯化水过滤装置但终末漂洗水合格率仅为直至基质液干燥后采用进行菌种鉴
,MALID-TOF
且水管路使用年限越久其合格率越低[]定以置信度的细菌名称作为
%,5。。VITEK MS≥99%
年月复旦大学附属中山医院内镜中心对菌种鉴定结果
202111,。
消化内镜的终末漂洗水监测发现纯化水中菌落数宏基因测序分析样本使用玻璃珠混合振
,
明显高于软式内镜清洗消毒技术规范荡破壁随后使用试剂
《》WS 507—,TIANamp Micro DNA Kit
的要求为此复旦大学附属中山医院内镜中盒提取样本的使用
2016。,DNA;Agilent 2100 Bioanalyzer
心联合医院感染管理科对此进行调查和分析制定和定量法进行文库的打断构建和质
,PCRDNA、
消毒和监测措施最终使终末漂洗用水符合要求控随后经滚环复制生成纳米球并滴加至测
,。,DNB,
序芯片中使用进行测序分析测序
。BGISEQ-200,
对象与方法完成后去除低质量和片段的数据经
1 DNA<35 bp,
专用微生物大数据库比对后生成细菌的种类、相对
调查对象内镜中心自动清洗设备和手工清丰度严格比对序列数
、(strict mapping reads num-
洗设备其中胃镜和肠镜的手工清洗设备台自标准化为序列值
。、18ber,SMRN),1M(reads per mil-
动清洗设备终末水管路均为年月份新改所包含的高质量细菌序列数值等数据
、201710lion,RPM)。
造后投入使用纯化水制备的机器设在内镜中心独结果判定根据软式内镜清洗消毒技术规
。 《
立的处置室由厂家每半年对纯化水滤膜进行更换范[]要求将滤膜培养结果
,,》WS507—20161>10 CFU
每月使用邻苯二甲醛对水管路进行消毒和水样送检。判定为水样不合格,其余判定为合格。根据《高通量
研究方法宏基因组测序技术检测病原微生物的临床应用规范

采样方法采集清洗消毒开始前胃镜和肠化专家共识宏基因组学测序技术在中重症
2021》《
感染中的临床应用专家共识第一版[]等指南与
镜的手工清洗槽、胃镜清洗机和肠镜清洗机的终末()》6-7
漂洗水样每个采样点采集的水样采样时既往临床分析经验将的细菌属或种
,100 mL,,SMRN≥50()
间为安装前第天安装后第纳入数据分析并将种值值的细菌
30、15、3,1、2、4、7、10、,SMRN<RPM
天将收集好的终末漂洗水使用一次性属或种判定为背景细菌并进行汇总和排
14、21、28。()mNGS,
过滤杯富集细菌至底部滤膜。将胃镜手工清洗槽水序分析。
样本的滤膜装至离心管中加入无菌统计学方法收集各样本检出细菌的种类高
50 mL,5 、
水后离心振荡混匀取其中进行宏基因组二质量细菌序列属种将每个样本
,1 mL、SMRN、SMRN。
代测序的细菌种进行排序并取前位进行汇总
(metagenomics next-generation sequencing,SMRN,10。
剩余样本的滤膜依据中华人民共和国药应用进行数据的录入和分析率的比较
mNGS)。《SPSS ,
中国感染控制杂志年月第卷第期
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采用确切概率法为差异有统计平均为消毒后为见表
Fisher’s,P≤ 274,8 454。2。
学意义。
表微酸性次***酸水发生机安装前后水样合格情况
1
结果
2 Table 1 Water specimen qualification before and after instal-
lation of slightly acidic hypochlorous acid water
安装前后水样合格情况安装前共采集水样generator

份其中份合格合格率为安装后共自动清洗机手工水槽
27,10,%;合格率
采集水样份份均合格合格率为安装编号采样时间采样合格采样合格
,,,()
5454100%份数份数份数份数%
前后合格率经确切概率法比较差异有统
Fisher’s,
计学意义见表安装前天
(P<)。1。1303 1 4 3
安装前天

17MALID-
鉴定显示份检出放线根瘤菌份检出嗜安装前天
TOF,10,5334 0 6 4
麦芽窄食单胞菌份检出黄色微杆菌份检出贪安装后第天
,2,5412 2 1 1 100
安装后第天
铜菌份检出藤泽***杆菌分检出少动鞘氨醇523344100
,4,2
安装后第天
单胞菌见图643344100
。1。
安装后第天
水样本测序分析测序数据774 4 3 3 100
mNGS mNGS
安装后第天
显示各样本的测序深度为8103 3 5 5 100
,~ M,RPM
安装后第天
为消毒前高质量细菌序列平均为9142 2 3 3 100
231~3 063。,
安装后第天
消毒后为消毒前细菌属10215 5 3 3 100
112 291,23 626;,SMRN
安装后第天
平均为消毒后为消毒前细菌种11285 5 4 4 100
83 791,11 496;,SMRN
注检出嗜麦芽窄食单胞菌和黄色微杆菌检出放线根瘤菌检出贪铜菌和藤泽***杆菌检出水生根瘤菌和少动鞘氨醇单胞菌
:A;B;C;D。
图不合格水样的细菌鉴定结果
1
Figure 1 Bacterial identification results of unqualified water specimens
表份水样本的测序结果
2 11mNGS
Table 2 mNGS sequencing results of 11 water specimens
编深度高质量细菌属属种编深度高质量细菌属属种
RPMRPM
号序列数数量值号序列数数量值
(M)SMRN*SMRN(M)SMRN*SMRN
1 51 906 48 939 45 32 804 1 5937 17 703 2 758 12 2 144 1 756
2 177 503 109 898 67 79 347 2 867
8 46 230 10 634 39 7 670 2 196
3 107 466 92 536 58 71 672 2 814
9 1 940 729 1 512 1 386
4 35 409 6 721 27 5 064 3 063
10 4 260 2 972 21 2 235 231
5 40 667 38 855 18 30 449 858
6 29 823 24 404 37 15 086 1 66211 12 945 4 899 20 4 477 458
注表示属
:*SMRN≥50。
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水样本中细菌基因多态性分析将各样本中瘤菌水生***杆菌戈登分枝杆菌新鞘氨醇杆菌
、、、
细菌种进行排序并取前位进行汇总等水生细菌安装后所有样本的测序结果为
SMRN,10。。,
结果显示安装前的样本中可检测出大量皮氏罗尔背景菌见表
,mNGS。3。
斯顿菌、耐金属贪铜菌、奥斯陆莫拉菌、日本慢生根
表份水样本的细菌种排序
3 11SMRN
Table 3 SMRN sequencing of bacterial species in 11 water specimens
编号编号编号编号编号编号
排123456
序细菌种名种细菌种名种细菌种名种细菌种名种细菌种名种细菌种名种
SMRNSMRNSMRNSMRNSMRNSMRN
皮氏罗尔斯顿菌日本慢生根瘤菌皮氏罗尔斯顿菌粪产碱杆菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌
111 64223 19116 **********
约翰逊不动杆菌水生***杆菌耐金属贪铜菌罕见无色杆菌洛菲不动杆菌奥斯陆莫拉菌
27 0474 3228 52155283278
耐金属贪铜菌戈登分枝杆菌奥斯陆莫拉菌氢噬胞菌浅绿色气球菌斯氏假单胞菌
36 2342 8816 61650164270
产黑色普雷沃菌卟啉杆菌草莓黄单胞菌纽伦堡潘多拉菌藤黄微球菌琼氏不动杆菌
46 2231 7665 77350118176
痤疮丙酸杆菌噬异物鞘脂菌约翰逊不动杆菌表皮葡萄球菌格氏沙雷菌牙龈卟啉单胞菌
55 1441 5184 31144110176
奥斯陆莫拉菌硝化螺旋菌产黑色普雷沃菌格氏沙雷菌氢噬胞菌巴塞尔贪铜菌
63 3671 4942 4313686171
草莓黄单胞菌新鞘氨醇杆菌脱硫化煤菌甜瓜鞘氨醇单胞菌粪产碱杆菌少动鞘氨醇单胞菌
72 8718401 4853375166
抗性棒杆菌亚硝化单胞菌少动鞘氨醇单胞菌约翰逊不动杆菌斯氏假单胞菌奇异劳特罗普菌
82 82364**********
表皮葡萄球菌尿气球菌金黄杆菌巴塞尔贪铜菌抗性棒杆菌粪产碱杆菌
92 3484249052971156
殊异韦荣球菌嗜肺军团菌殊异韦荣球菌粪产碱杆菌奥斯陆莫拉菌口腔普雷沃菌
101 97129**********
编号编号编号编号编号
排序7891011
细菌种名种细菌种名种细菌种名种细菌种名种细菌种名种
SMRNSMRNSMRNSMRNSMRN
甜瓜鞘氨醇单胞菌克氏罗氏菌格氏沙雷菌腐生葡萄球菌抗性棒杆菌
112389015208322
粪产碱杆菌表皮葡萄球菌巴塞尔贪铜菌斯氏假单胞菌腐生葡萄球菌
29260915137244
罕见无色杆菌金色黏液棒杆菌氢噬胞菌约翰逊不动杆菌约翰逊不动杆菌
37358510114109
纽伦堡潘多拉菌塞内加尔厌氧球菌表皮葡萄球菌奥斯陆莫拉菌奥斯陆莫拉菌
45937567788
肉桂色迪茨菌藤黄微球菌斯氏假单胞菌粪产碱杆菌斯氏假单胞菌
55620157381
洛菲不动杆菌约翰逊不动杆菌纽伦堡潘多拉菌氢噬胞菌热噬淀粉芽孢杆菌
65113756769
表皮葡萄球菌迪茨菌甜瓜鞘氨醇单胞菌咸海鲜球菌沼泽库克菌
74312746354
巴塞尔贪铜菌马赛放线菌粪产碱杆菌罕见无色杆菌浅绿色气球菌
8437645951
藤黄微球菌具核梭杆菌缺陷短波单胞菌巴塞尔贪铜菌粪产碱杆菌
9373734947
氢噬胞菌产黑色普雷沃菌海床游动微菌口腔普雷沃菌罕见无色杆菌
**********
消毒和感染预防带来巨大挑战。
讨论本研究次基线采样显示终末漂洗水中可鉴
3 3,
定出大量的放线根瘤菌、嗜麦芽窄食单胞菌、黄色微
医疗用水主要来自市政自来供水或二次供水
,杆菌、贪铜菌、藤泽***杆菌、少动鞘氨醇单胞菌等
停滞的水流和复杂而狭长的供水管道为水源性细菌水源性细菌总合格率仅为尽管自动清
,%。
的繁殖提供了有利条件,因此,医疗用水在使用、储洗机和手工槽的终末漂洗水均来源于内镜中心独立
存、输送过程中极易受到微生物的污染[8]。国内外的纯化水处理室,且该处理室定期进行滤膜更换和
研究[]表明终末漂洗水的合格率仅为水管路消毒但份自动清洗机的终末水样仅有
9-10,40%~,111
是造成后续内镜污染的重要原因之一若终份合格而份手工清洗槽的水样有份合格尽
70%,。,169。
末漂洗水管路长期未消毒,内镜内壁可形成以奥斯管缺乏对水管路中细菌生物膜的鉴定标准,但结合
陆莫拉菌、嗜麦芽窄食单胞菌、铜绿假单胞菌、藤黄既往研究[11]结论以及放线根瘤菌、贪铜菌、藤泽甲
微球菌等水生类细菌为主的生物膜[]给内镜的基杆菌在多次采集的样本中反复存在高测
11-12,,mNGS
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序数据也证实此类细菌大量存在,因而推测纯化水值。随后多个时间点所检测的水样培养结果阴性,
制备点至出水口的管路已形成细菌生物膜并持续且种排序前的细菌多为背景细菌因此
,SMRN10,
性向纯化水管路中播散多种细菌。研究[13]指出,随推测该持续性消毒法已将水管路中持续存在的生物
水流播散的细菌易造成过滤的膜孔堵塞导致纯化
,膜清除,具有良好的实用价值和推广意义。
水在滤过和储存过程发生二次污染王晓蕾等[]本研究也存在以下局限采样时未对新生
。14:(1),
对内镜终末漂洗水的连续监测显示自来水经纯化
,成的纯化水添加中和剂,对培养结果具有一定的影
水系统制备后细菌含量反而增高至响管路中的细菌生物膜是通过对纯化水的细菌
218 CFU/mL。;(2)
张枭然等[4]对新建内镜中心的验收发现尽管制水培养结果以及对消毒前后的数据量变化
,,、mNGS
端的市政自来水纯水制备位点未检出菌落但进入
、,情况进行间接验证,未能直接对水管路进行采样以
内镜手工清洗设备前的水样与纯水箱回水口检出的及鉴定分析未来需改进研究方法测序
,;(3)mNGS
菌落数较高表明纯化水的出水管路极易受到污染
,。过程不可避免产生背景细菌数据,但国内尚无统一
由于细菌生物膜表面通常由多种细菌以及多聚
的鉴别标准和排除原则。本研究根据既往临床样本
物蛋白质核糖类物质所组成的聚合物包围具有
、、,的数据及阴性对照管的细菌数据集,经验性将
抵抗外界消毒剂的作用并保护内部细菌结构和功值过低的细菌且所有样本中频繁出现的细菌
,SMRN
能完整[,]史庆丰等[]的研究表明含***消毒剂
1215。5、判定为背景细菌,该判定方法需进一步验证与评估。
过氧乙酸、戊二醛等化学消毒法或臭氧、紫外线等物
理消毒法存在作用时间短浓度不足或穿透力差等
、利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。
问题,无法清除管路中已形成的生物膜。为此,内镜
中心于年月初引入微酸性次***酸水发生
202111[参考文献]
机向纯化水管路中恒定输出的次***酸
,10 mg/L,
进行持续性化学消毒安装后的第刘运喜邢玉斌巩玉秀等软式内镜清洗消毒技术规范
。1、2、4、7、10、[1] ,,,.
中国感染控制杂志
天培养结果显示所有样本均未培养出细WS507—2016[J].,2017,16(6):587-
14、21、28,
592.
菌,显示该消毒方案的有效性。
本研究同时借助技术对终末漂洗水中细Liu YX,Xing YB,Gong YX,et for cleaning
mNGSand disinfection technique of flexible endoscope[J].Chinese
菌进行深度测序分析结果显示消毒前水样不仅存在
,Journal of Infection Control,2017,16(6):587-592.
耐金属贪铜菌奥斯陆莫拉菌日本慢生根瘤菌水生周晓红李晓君郭健芬等一起胃肠镜终末漂洗水微生物
、、、[2] ,,,.
检测超标事件的干预处置报告中国消毒学杂志
***杆菌、新鞘氨醇杆菌等与培养一致的细菌,同时[J].,2022,
还鉴定出皮氏罗尔斯顿菌[16]、戈登分枝杆菌[17]、约翰39(3):239-240.
Zhou XH,Li XJ,Guo JF,et report of exceeding the
逊不动杆菌[18]等潮湿环境普遍存在,但受培养条件
所限而无法鉴定的细菌显示对由复杂细菌standard in microbiological detection of final rinsing water for
,mNGS
gastrointestinal endoscopy[J].Chinese Journal of Disinfec-
所构成生物膜的鉴定优势此外在定性识
。,mNGStion,2022,39(3):239-240.
别感染性病原体与优势细菌的构成研究中具有良好曾其莉江永忠李艳伟等医疗机构内镜终末漂洗水微生
[3] ,,,.
的应用效果[]但对病原体的定量研究较为少见物污染调查与风险分析中国消毒学杂志
19-21,,[J].,2022,39(3):
尤其对同时涉及病原体种类和丰度的研究极为罕203-205,210.
见测序分析时由于背景细菌的存在将影Zeng QL,Jiang YZ,Li YW,et and risk
。mNGS,
analysis of microbial contamination of endoscopic final rinse wa-
响临床样本以及环境样本的结果解读,前者可依据
terinmedicalinstitution[J].ChineseJournalofDisinfection,
临床经验和测序数据综合分析而判别但目前尚缺
,2022,39(3):203-205,210.
乏环境样本中目标菌和背景菌的判别标准和检测阈张枭然阎颖千新玲等新建内镜中心验收时纯水系统染
[4] ,,,.
值本研究经验性将种属的细菌菌情况调查与处置中国感染控制杂志
。()SMRN>RPM[J].,2021,20(12):
考虑为目标细菌,并结合培养结果以及安装前、后细1114-1118.
ZhanXR,YanY,QianXL,
菌种类和丰度的变化而综合分析消毒效果。结果显g g p
of bacterial contamination in pure water system during accep-
示,微酸性次***酸水使用后的第天,水样中高质量
1[]
细菌序列细菌属细菌种数值显著tance of newly built endoscopy Journal of
、SMRN、SMRNInfection Control,2021,20(12):1114-1118.
降低各样本种值均未超过相对应的史庆丰胡必杰崔扬文等上海市所三级医疗机构软
,SMRNRPM[5] ,,,.30
中国感染控制杂志年月第卷第期
·226·20227217 Chin J Infect Control Vol 21 No 7 Jul 2022
式内镜终末漂洗水现状调查中华医院感染学杂志
[J].,2020,(12):1337-1339.
王晓蕾范晶晶沈益鸣等某医院集中式纯水供应系统微
30(6):923-926.[14],,,.
生物污染情况和消毒效果调查中国消毒学杂志
Shi QF,Hu BJ,Cui YW,et status of final rinse[J].,2019,
water for flexible endoscopes in30 tertiary medical institutions36(12):913-915.
of Shanghai[J].Chinese Journal of Nosocomiology,2020,30Wang XL,Fan JJ,Shen YM,et