液相色谱柱的选择和方法开发.ppt

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重现性
分离度(R)
-保留时间(V,T,K)
-选择性(α)
-柱效 (N)
灵敏度
色谱柱类型、选择和方法开发
色谱柱与色谱条件对色谱性能的影响
分离度《
-选择性〈键合类型,基质表面特性;流动相、温度
-柱效〈保留体积,粒径,柱长,基质表面特性;流动相,温度,上样量,流速
峰对称性《基质表面特性,键合类型,流动相,温度
保留体积《柱长,孔隙率,比表面积,基质表面特性,键合类型;流动相,温度
灵敏度《粒径,基质表面特性,键合类型;流动相,温度
稳定性和重现性《基质表面特性,键合类型;流动相,温度
流动相《pH,缓冲盐种类,溶剂;
影响色谱柱性能的主要因素
1、色谱柱的构型
色谱柱内径
色谱柱长度
2、固定相柱填料
粒径
比表面积
孔径
孔隙率
基质表面特性:
-表面活性:硅胶纯度、硅羟基的酸性、均匀性和数量
-耐碱性
键合类型
-官能团、是否封尾
-键合相的保留行为、耐酸性
色谱柱的构型对色谱柱性能的影响
色谱柱的构型对色谱柱性能的影响:长度和直径
色谱柱尺寸对色谱分离的影响:
•短柱(15-100mm)-运行时间短,柱压低

•长柱(150-250mm)-分辨率高,运行时间长
•窄径柱()–满足检测器和样品量限制
•宽径柱(3-)-载样量高,抗污染,寿命
制备柱(内径>10mm)–用于纯化制备
柱填料对色谱柱性能的影响
柱填料对C18色谱柱性能的影响:粒径
硅胶粒径和类型对柱效的影响
d
硅胶粒径和类型对压力的影响
柱填料对C18色谱柱性能的影响:粒径II
目前市场主要可供选择的填料粒径
,,-快速液相色谱柱:匹配快速色谱仪
-多孔壳层:在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo)
,-普通快速分析
-常规分析
颗粒越小,柱效越高,
但是耐污染性能下降,柱压升高.