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电镜酶细胞化学技术与电镜免疫细胞化学技术
医学院电镜室2012年5月5日
概述电镜细胞化学技术
电镜细胞化学技术是电镜技术与细胞化学技术相结合产生的一门新技术,也称超微结构细胞化学。
目的:将化学研究与形态观察相统一,要求在细胞超微结构水平上研究细胞内各种生化物质(蛋白质、核酸、脂肪、碳水化合物等)的定位情况以及这些生化物质在细胞内的动态变化,用以阐明细胞、细胞器结构与功能的相互关系。
电镜细胞化学技术主要包括:
电镜酶细胞化学技术
电镜免疫细胞化学技术
特异酶消化印证技术
电镜放射自显影技术
电镜原位杂交技术
超微示踪技术等
★电镜酶细胞化学与光镜酶组织化学的比较:
光镜酶组织化学电镜酶细胞化学
分辨率低分辨率高
难于鉴别细胞器和酶的精确位置易于鉴别和定位
反应产物为有色沉淀反应产物必需有高电子密度
可显示100多种酶可显示40余种酶
★电镜酶细胞化学的基本原理
酶细胞化学反应
酶+底物初级反应产物最终反应产物
 

(可溶性)(不溶性)
酶反应
捕捉反应
捕捉剂
常用捕捉剂有:重金属(铅、钡、铜)盐、重氮盐、二氨基联苯***等。
捕捉反应的思路是形成在显微镜下可见的最终反应产物,即最终产物一定是光镜下具有鲜明颜色的物质,在电镜下则必须是高电子密度的物质。
★电镜酶细胞化学反应的主要方法
⑴金属盐沉淀法
将重金属作为捕捉剂,使酶反应产物直接或间接与之结合生成金属盐沉淀。
①酶作用于底物,初级产物与捕捉剂形成金属盐沉淀。
R-PO4+H2O磷酸酶R·OH+H3PO4Pb2+PbHPO4↓
琥珀酸脱氢酶
琥珀酸盐铁***化物
延胡索酸盐亚铁***化物
Cu2+
亚铁***化铜(高电子密度)
(3)锇化法
嗜锇物质生成法在酶作用下,生成“嗜锇”性捕捉底物,经锇酸作用后形成高电子密度的锇黑
过氧化物酶
 H2O2nDAB(四盐酸二氨基联苯***)
H2ODAB氧化原合物
锇酸
锇黑(高电子密度)
1、固定:%戊二醛和4%多聚甲醛混合液作为固定液,根据不同酶的特性,也可以单独使用其中一种作为固定液。