不同炮制方法对牡丹皮多糖和总黄酮含量的影响.docx

该【不同炮制方法对牡丹皮多糖和总黄酮含量的影响 】是由【科技星球】上传分享，文档一共【18】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【不同炮制方法对牡丹皮多糖和总黄酮含量的影响 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。不同炮制方法对牡丹皮多糖和总黄***含量的影响
 
 
沈莉+石秋霞+高晓忠+吴春雷+周玉波
Summary:为了比较不同炮制方法对牡丹皮多糖和总黄***含量的影响,本研究以牡丹皮生品、酒制品、炒黄制品、炒焦制品和炒炭制品为材料,分别测定了它们多糖和总黄***的含量。结果发现,%,%,%,%,%;牡丹皮生品总黄***%,%,%,%,%。牡丹皮经过炮制后多糖和总黄***的含量均发生变化,以酒制品中的含量为最高。
Key:牡丹皮;炮制;多糖;总黄***
::A:1002-1302(2014)11-0324-03
牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹(Paeoniasuffruticosa)的干燥根皮,性微寒,味苦、辛,归肝、心、肾经,是我国的传统中药之一。其功效为清热凉
血、活血化瘀等,主要用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、痈肿疮毒等[1-2]。历史上牡丹皮的炮制方法很多,主要有酒制、炒制、煮制、制炭等。生品长于清热凉血、活血化瘀,丹皮制炭后凝血作用增强,有凉血止血的作用[3],用于吐血、衄血。目前临床中最常用的是牡丹皮生品,“清炒”“酒炒”“炒炭”仅有少部分地区沿用,研究也多集中于生品,而对其炮制品的研究较少[4-5]。本试验通过比较牡丹皮及其不同炮制品中多糖和总黄***的含量,为深入研究牡丹皮成分提供数据支持。
1材料

FZ102粉粹机(北京市永光明医疗仪器厂);METTLERAL204型分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];80-2台式低速离心机(上海手术器械厂);HP8453型紫外-可见分光光度计(惠普公司)。

牡丹皮产地为安徽,购自浙江震元医药连锁有限公司,。芸香苷(中国食品药品检定研究院,批号:100080-200707),D-无水葡萄糖(中国食品药品检定研究院,批号:110833-200904),浓硫酸、乙醇、重蒸苯酚、氢氧化钠、***化铝、亚***钠等试剂为分析纯。
2方法与结果

牡丹皮生品:取牡丹皮20g,纯净水洗3次后,晾干备用。牡丹皮酒制:取牡丹皮,照生品清洗法处理后晾干,每500g牡丹皮加黄酒60g,拌匀后闷透,放锅内用文火加热炒干,取出放凉。牡丹皮炒黄:取牡丹皮,照生品清洗法处理后晾干,用文火微炒,取出放凉备用。牡丹皮炒焦:取牡丹皮,照生品清洗法处理,晾干,用文火炒至微焦,取出放凉备用。牡丹皮炒炭:取牡丹皮,照生品清洗法处理后晾干,用中火加热炒至焦炭色,取出放凉。


称取牡丹皮生品粉末30g,加入80%乙醇(10倍量)后在90℃水浴中回流3次(2h/次),抽滤后取药渣挥尽乙醇,再加水(10倍量)回流提取3次(2h/次),趁热抽滤,合并滤液,减压浓缩后,加95%乙醇至醇含量达80%,置4℃冰箱中静置12h,充分沉淀后过滤,干燥后得到粗多糖。
粗多糖水复溶后,用Servage(三***甲烷-正丁醇,4∶1)法进行除蛋白操作[6],反复多次后用考马斯亮蓝法检验至无蛋白[7]。取上清液,加入乙醇,使溶液中醇浓度达到80%,4℃静置过夜后离心,沉淀用热水复溶后抽滤,滤液再重复1次醇沉淀操作,离心后的沉淀分别用无水乙醇、***、***洗涤,烘干至恒重,得到精制的牡丹皮多糖。

,加入80%乙醇50mL于90℃水浴中回流2次,每次2h,过滤后取滤渣挥尽乙醇,再加50mL水回流提取3次,每次2h,抽滤后合并滤液,浓缩后转移至50mL容量瓶中,定容即得。

取无水葡萄糖(干燥至恒重),加水溶解后定容,。

、、、、,加水至刻度。,%苯酚溶液,,盖上试管塞,摇匀后置沸水浴中加热反应30min,取出后放置冰水浴中冷却至室温。以相应试剂作空白参比,在488nm波长处测定吸光度D。以标准溶液浓度(x)为横坐标,吸光度y为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程y=-(r=),~。

,加水溶解后定容,。,按“”节操作测定吸光度,通过回归方程求出精制多糖溶液中的葡萄糖浓度,并计算其中含量。按下式计算换算因子:f=W/(C×D),式中W为多糖质量(mg),C为多糖中葡萄糖浓度(mg/mL),D为稀释倍数。测得换算因子f=(n=6)。

,置10mL量瓶中加水定容,,按“”节操作,测定吸光度,之后每隔15min测定1次,连续测定
2h,%,表明供试液室温下2h内稳定性良好。endprint

,按“”节操作测定,平行测定6份,%,表明仪器具有良好的精密度。

取同一批次的牡丹皮生品6份,按“”节方法制备供试品溶液,,置10mL量瓶中加水定容,,按“”节操作测定吸光度,%,表明本试验具有良好的重复性。

,分别加入葡萄糖对照品10mg,按“”节方法制备供试品溶液,,用蒸馏水定容,,按“”节方法测定,%,%(n=6),见表1。

精确量取“”,用蒸馏水定容,,按“”节方法测定吸光度,通过上述回归方程计算出供试液中葡萄糖浓度,再按下列公式计算供试品中多糖的含量:含量=(C×D×f/W)×100%,其中C为供试液中葡萄糖的浓度,D为稀释倍数,f为换算因子,W为供试品干品质量。得到的结果见表2。
***含量测定

,加入50mL的75%乙醇加热回流提取3次(2h/次),过滤,将滤液减压浓缩至无乙醇,用同体积***萃取除去叶绿素及蜡质等,最后用75%乙醇定容至50mL,得到总黄***样品溶液。

,用60%乙醇溶解,再定容至50mL即得。

、、、、,分别置10mL容量瓶中,%亚***钠溶液,摇匀后放置6min;%***化铝溶液摇匀后放置6min,再加4mL的4%氢氧化钠溶液,用60%乙醇定容,摇匀,放置15min后,以相应试剂作空白参比,于510nm波长处测定吸光度。以芸香苷浓度(x)为横坐标,吸光度(y)为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程:y=-(r=),~。

,按照“”节操作,测定吸光度,之后每隔10min测定1次,连续测定1h,%,表明供试液室温下1h内稳定性良好。

,按“”节操作平行测定6份,%,表明仪器具有良好的精密度。

取同一批次牡丹皮生品6份,按“”节方法制备供试液,,按照“”节操作测定,%,表明本试验重复性良好。

取6份牡丹皮生品,,分别加入芸香苷对照品20mg,按照“”节操作制备供试液,,按照“”节操作测定,%,%(n=6),见表3。

精确量取“”,按照“”节操作测定,再依据回归方程求出供试品中总黄***的浓度,结果见表4。
3讨论
长期以来,对牡丹皮的研究较多集中于酚及酚苷类、单萜及苷类等活性物质,而对于丹皮多糖的研究很少。然而丹皮多糖有明显的降血糖、保护肾脏及提高免疫等功效,是颇具发展前景的一种天然活性物质[8-9]。本研究通过计算葡萄糖和牡丹皮精制多糖之间的换算因子,并以此校正多糖含量的方法,测定了牡丹皮及其炮制品中多糖的含量,多糖含量按酒制品、炒黄制品、炒焦制品、生品、炒炭制品次序依次降低。
近年来研究人员从牡丹皮中分离得到黄***类化合物[10],其中儿茶素、槲皮素、山柰素是清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、O-2[KG-*2]·自由基,抑制酪
氨酸酶、高级糖化物终产物(AGES)产生的主要活性物质[11]。试验表明,牡丹皮及其不同炮制品中黄***的含量差异较大,从高到底依次为:酒制品>生品>炒炭制品>炒焦制品>炒黄制品。由此可见,牡丹皮除酒制品外,其他方法炮制后的总黄***含量均有降低。通过本试验研究可为牡丹皮的炮制研究提供参考,同时也为牡丹皮的综合应用提供科学依据。
Reference:
[1]:一部[M].北京:中国医药科技出版社,2010:160.
[2]张虹,丁安伟,[J].江苏中医药,2007,39(9):75-77.
[3]赫炎,王祝举,[J].中国实验方剂学杂志,2007,13(11):67-68.
[4]丘志春,孙冬梅,[J].医学研究杂志,2009,38(4):131-133.
[5]赵学龙,丁安伟,张丽,[J].中华中医药学刊,2008,26(9):1907-1910.
[6]屠婕红,[J].时珍国医国药,2009,20(2):281-282.
[7]王文平,郭祀远,李琳,[J].食品研究与开发,2008,29(1):115-117.
[8]彭代银,韩岚,张丛芬,[J].安徽中医学院学报,2005,24(2):30-32.
[9]刘吉成,[M].北京:人民卫生出版社,2008.
[10]丁安伟,张丽,赵学龙,***类成分的动态变化[J].中国中药杂志,2009,34(8):965-968.
[11]DingHY,LinHC,[J].JournalofCosmeticScience,2009,60(3):347-

,按“”节操作测定,平行测定6份,%,表明仪器具有良好的精密度。

取同一批次的牡丹皮生品6份,按“”节方法制备供试品溶液,,置10mL量瓶中加水定容,,按“”节操作测定吸光度,%,表明本试验具有良好的重复性。

,分别加入葡萄糖对照品10mg,按“”节方法制备供试品溶液,,用蒸馏水定容,,按“”节方法测定,%,%(n=6),见表1。

精确量取“”,用蒸馏水定容,,按“”节方法测定吸光度,通过上述回归方程计算出供试液中葡萄糖浓度,再按下列公式计算供试品中多糖的含量:含量=(C×D×f/W)×100%,其中C为供试液中葡萄糖的浓度,D为稀释倍数,f为换算因子,W为供试品干品质量。得到的结果见表2。
***含量测定

,加入50mL的75%乙醇加热回流提取3次(2h/次),过滤,将滤液减压浓缩至无乙醇,用同体积***萃取除去叶绿素及蜡质等,最后用75%乙醇定容至50mL,得到总黄***样品溶液。

,用60%乙醇溶解,再定容至50mL即得。

、、、、,分别置10mL容量瓶中,%亚***钠溶液,摇匀后放置6min;%***化铝溶液摇匀后放置6min,再加4mL的4%氢氧化钠溶液,用60%乙醇定容,摇匀,放置15min后,以相应试剂作空白参比,于510nm波长处测定吸光度。以芸香苷浓度(x)为横坐标,吸光度(y)为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程:y=-(r=),~。