新编免疫组化.ppt

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第二节抗体(antibody)
一、抗体的概念
机体受到抗原刺激后,通过体液免疫应答,B淋巴细胞活化、增殖、分化为浆细胞,由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白。
二、抗体的性质和种类
(一)抗体的一般性质
免疫球蛋白约等于抗体,分五类:IgG,IgM,IgA,IgD,IgE
(二)免疫原性和分类特性
免疫球蛋白都是大分子蛋白质,具有免疫原性,课作为抗原。由于存在着轻链和重链,可变区和稳定区,因此,分子结构差异较大,免疫原性比较复杂。
(三)抗体的种类
1、根据抗体的途径或来源不同分为
免疫抗体;天然抗体;自身抗体
2、根据抗原抗体在试管内是否出现肉眼反应分为
完全抗体;不完全抗体
三、抗原与抗体反应
称为免疫学反应。
在体内进行称为免疫反应;在体外称为血清学反应
四、抗体形成的机制
(一)免疫应答的产生
1、感应阶段(识别及加工处理抗原阶段)
2、反应阶段(淋巴细胞增殖分化阶段)
3、效应阶段(发生免疫反应阶段)
(二)影响抗体产生的因素
1、抗原的质和量
2、机体方面
3、佐剂的增强免疫作用
第三节有关基本技术方法
一、抗体的制备
(一)抗体的制备方法
能制备出具有很高特异性和敏感性的高效价多克隆和单克隆抗体。
(血清抗体]:指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后从血清中分离提纯的抗体。
:是1975年由KohlenhMilstein发明的一种新技术。其原理是将体外培养的骨髓细胞和免疫的脾细胞相融合,产生杂交细胞。这种融合的杂交细胞既有骨髓细胞的无限生长能力,又有浆细胞分泌单一抗体的能力。将该免疫细胞纯化,成为单克隆系,就能产生大量专一的高纯度的抗体,即单克隆抗体(monoclonalantibody,McAb)
单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较
特性多克隆单克隆
组成多种类抗体的混合物单一种类的抗体
特异性低高
针对多个抗原决定族针对单一的抗原决定族
亲和力平均亲和力较高不定,较低
交叉反应高低
(二)抗体的配制方法
1、抗体贮存
2、抗体使用液的配制
二、组织材料的处理
尽量保存好抗原性不丢失、不扩散、不被破坏
三、免疫染色
1、增强特异性染色方法
蛋白酶消化法;合适的抗体稀释度;温育时间
2、减少或消除非特异性染色方法
3、显色反应的控制
4、复染
四、对照
阳性对照;阴性对照
五、结果的判断
(一)阳性细胞的染色特性
1、分胞浆、细胞核、细胞膜表面阳性
2、灶状和弥漫性
3、非特异性的认知
4、切片质量不佳出现的阳性要排除
(二)染色失败的几种原因