贲门癌的病理学类型分析以及免疫组化技术研究贲门癌中MTA1和E-cadherin蛋白表达的统计相关性.docx

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【Summary】目的探讨MTA1和E-cadherin蛋白的表达与贲门癌的浸润、转移和分化程度之间的关系,以及它们三者之间的相关性。方法采用免疫组织化学方法对60例贲门癌组织和18例癌旁组织中MTA1和E-cadherin蛋白的表达情况进行检测。结果MTA1的表达与贲门癌的浸润深度无显著相关性,与贲门癌的淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(),E-cadherin的表达与贲门癌的浸润深度、转移呈负相关(、),与分化程度无关。Spearman等级相关分析显示,MTA1与E-cadherin的表达呈负相关(rs=-,P<)。结论MTA1的高表达促进贲门癌的淋巴结转移;E-cadherin表达的减少能促进贲门癌的侵袭和淋巴结转移;MTA1与E-cadherin的表达呈负相关。
【Keys】贲门癌;MTA1;E-cadherin;浸润;转移;分化;相关性;免疫组织化学
贲门癌的侵袭、转移是其主要的致死原因,是一个复杂的病变过程,涉及多个基因的改变。MTA1和E-cadherin基因被认为与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关。本研究采用SP免疫组织化学方法,检测了60例贲门癌组织和18例癌旁组织中MTA1及E-cadherin的表达情况,分析它们与贲门癌侵袭转移等临床病理特征的关系,以及它们三者之间表达的相关性。
1材料与方法
,以18例癌旁组织为对照组。全部病例均经外科手术切除和病理检查,获取详细资料。所有标本经常规甲醛固定、石蜡包埋。每例组织蜡块4微米连续切片10张,1张切片HE染色作光镜下诊断复查,另2张切片作MTA1和E-cadherin免疫组织化学染色,其余备用。
~1999年间的手术标本,其中男46例,女14例;最大年龄73岁,最小年龄43岁。根据2002年WHO关于胃肿瘤的新分类[1]将其分为乳头状腺癌、管状腺癌、未分化癌等。其中,腺鳞癌1例,未分化癌2例,乳头状腺癌6例,管状腺癌51例。为了方便统计,将乳头状腺癌与高分化管状腺癌列入高分化腺癌组,将未分化癌列入低分化腺癌组,并将高分化腺癌组与中分化腺癌组合并为一组。
(工作浓度1:200)以及福州迈新公司的即用型鼠抗人E-cadherin单克
隆抗体。即用型SP超敏试剂盒购自福州迈新公司,严格按SP法步骤操作。用PBS液代替一抗作为阴性对照,已知阳性标本作阳性对照。
,常规脱蜡至水化,以枸橼酸盐缓冲液微波炉抗原修复法修复抗原,其它步骤均严格按照说明书操作。
,部分细胞胞浆也呈阳性反应,呈棕黄色颗粒状;E-cadherin阳性部位定位于细胞膜,呈棕黄色颗粒状。采用Barnes半定量法[2]进行阳性结果判定,具体如下:阳性细胞数量计0~4分:无计0分,≤25%计1分,26%~50%计2分,51%~75%计3分,>75%计4分。染色强度计0~3分:无色计0分,浅黄色计1分,棕黄色计2分,棕褐色计3分。将两项指标评分相乘,根据总分分为四级:即0分为阴性(-),1~2分为弱阳性(+),3~4分为阳性(++),大于4分则为强阳性(+++)。
。
2结果
-cadherin表达与贲门癌侵袭、转移以及分化程度的关系
如表1所示,在60例贲门癌标本中有33例MTA1表达阳性,%,%的阳性率(P=)。其中,%,%,两组相比较无显著性差异;%,%,两组相比较具有显著性差异(P=);低分化腺癌组
%,高、%,两组相比较具有显著性差异(P=)。
表1MTA1表达与贲门癌浸润、转移以及分化程度的关系
MTA1的表达
n
-
+
++
+++
浸润深度
肌层
20
9
2
4
5
浆膜层
40
18
8
5
9
淋巴结转移
无
27
16
1
2
8
有
33
11
9
7
6
分化程度
高、中分化腺癌
40
22
6
4
8
低分化腺癌
19
5
4
5
5
癌旁组织
18
16
1
1
0
如表2所示,在60例贲门癌标本中有37例E-cadherin表达阳性,%,%的阳性率(P=)。其中,浸润浆膜
层组E-%,浸润肌层组E-%,两组相比较具有显著性差异(P=);有淋巴结转移组E-%,无淋巴结转移组E-%,两组相比较具有显著性差异(P=);低分化腺癌组E-%,高、中分化腺癌组E-%,两组相比较无显著性差异(P=)。
表2E-cadherin表达与贲门癌浸润、转移以及分化程度的关系
E-cadherin的表达
n
-
+
++
+++
浸润深度
肌层
20
4
9
4
3
浆膜层
40
19
4
7
10
淋巴结转移
无
27
6
8
8
5
有
33
17
5
3
8
分化程度
高、中分化腺癌
40
15
10
7
8
低分化腺癌
19
8
3
3
5
癌旁组织
18
2
7
8
1
-cadherin表达的相关性
结果如表5所示,在MTA1阴性表达的27例病例中,E-%(22/27),而在MTA1阳性表达的33例病例中,E-%(15/33),统计学分析结果显示两者的表达密切相关(c2=,P=),Spearman等级相关分析提示MTA1表达与E-cadherin表达呈负相关(rs=-,P<)。
表5MTA1表达与E-cadherin表达的相关性
MTA1
E-cadherin
-
+
++
+++
-
5
7
5
10
+
6
1
2
1
++
4
3
0
2
+++
8
2
4
0
-cadherin联合表达与贲门癌浸润和转移的相关性
在22例MTA1(-)/E-cadherin(+)的贲门癌标本中,有10例浸润至浆膜层(%),8例发生淋巴结转移(%);而在18例MTA1(+)/E-cadherin(-)的贲门癌标本中,有15例浸润至浆膜层(%),16例发生淋巴结转移(%)。两组浸润至浆膜层的阳性率以及淋巴结转移率相比均有显著性差异,。
3讨论

本研究采用免疫组织化学方法,测定了MTA1蛋白在60例贲门癌和18例癌旁黏膜中的表达,结果表明,MTA1蛋白主要表达于细胞核和细胞浆,这与MoonWS[3]的报道一致。实验组MTA1阳性率(%)显著高于对照组(%),说明MTA1在贲门癌的发生中可能起作用。淋巴结转移组MTA1的阳性率(%)显著高于无淋巴结转移组(%),说明MTA1的高表达能促进贲门癌的淋巴结转移,这与TohY[4]对食管癌及MoonWS对肝癌的研究结果一致。本研究还表明,高、中分化腺癌组MTA1的表达(%)显著低于低分化腺癌组(%)MTA1的表达(P=),这与TohY[4]等人对食管癌研究结果一致,说明MTA1有可能阻止癌细胞分化成熟,有待于进一步研究和分析。本实验的结果表明,浸润肌层组MTA1的阳性率(%)与浸润浆膜层组(%)无显著性差异,这与诸多学者的研究报道不一致,这可能与样本量的大小有关。另外,本实验采用的是
针对石蜡切片的免疫组织化学染色来研究MTA1蛋白的表达,而很多学者为mRNA水平的研究,研究方法的差异可能导致结果不一致。
-cadherin的表达及意义
肿瘤细胞间黏附因子损失导致的个体肿瘤细胞从原发肿瘤脱落游离,是肿瘤侵袭转移的始动环节,肿瘤侵袭有赖于细胞在不同时相的粘附与解粘附。E-cadherin蛋白通过胞浆连环素与细胞骨架蛋白相连,是介导细胞之间以及细胞与细胞外基质黏附的主要分子之一。
通过近些年的研究,多数学者认为E-cadherin粘附功能的丧失是细胞获得高侵袭性的关键[513]。本实验亦证实了这一观点,认为E-cadherin是一种肿瘤转移抑制基因,其表达减少促进肿瘤的侵袭和转移,其活性下降可能是癌细胞脱离原发灶的关键环节。本实验的结果表明,E-cadherin的表达强度与贲门癌的分化程度并无关系,这点与众多学者的研究结果不一致,可能是病例数较少的原因,也可能与判断标准及标本选取差异有关。本实验还发现,在一些肿瘤转移性较强的病例,E-cadherin强阳性表达在细胞膜上。这种强阳性表达E-cadherin蛋白的癌细胞是如何脱离原发灶发生远处转移的?其具体机制目前尚不清楚。
-cadherin表达的相关性
本实验的结果显示,随着MTA1表达的增高,E-cadherin的表达降低,两者呈显著负相关,MTA1阳性表达和E-cadherin阴性表达共同促进贲门癌的浸润和转
移,MTA1(-)/E-cadherin(+)组浸润至浆膜层者较少,发生淋巴结者也较少,而MTA1(+)/E-cadherin(-)组浸润至浆膜层多,易发生淋巴结转移,两组相比具有显著性差别,本研究认为,MTA1对E-cadherin表达可能起下调作用,MTA1阳性表达和E-cadherin阴性表达在贲门癌的侵袭和转移中起联合作用。因此联合检测MTA1/E-cadherin,可以较客观、准确地反应贲门癌的侵袭和转移的趋势,为贲门癌的治疗和预后提供依据。
Reference
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[2]BarnesDM,DublinEA,:,1993,24:469-476.
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2004,35(4):424.
[4]TohY,OhgaT,EndoK,AdachiE,KusumotoH,HaraguchiM,OkamuraT,-associatedMTA1proteinanditsrelationshiptodeacetylationofthehistoneH4
,2004,3:362-367.
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