实验五、细菌的芽孢染色法课件.ppt

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实验的目的要求
学****并掌握芽孢染色法
初步了解芽孢杆菌的形态特征
细菌芽孢染色的意义
芽孢又称内生孢子,是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体,通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
形成芽孢需要一定的外界条件,这些条件因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2)条件下才能形成芽孢,而破伤风芽孢杆菌则在无氧条件下形成芽孢。
芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力,尤其耐高温。如肉毒梭状芽孢杆菌的芽孢,在沸水中可存活6小时,在180℃的干热中,10分钟仍可存活。在一定条件下,芽孢保持活力数年至数十年之久。高温灭菌的主要目的就是杀死细菌的芽胞。
芽孢在适宜条件下萌发成新个体,但一个芽孢只产生一个营养体,所以芽孢不是一种繁殖方式。
细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。
所有的芽孢染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色,再使菌体脱色,而芽孢上的染料则难以渗出,故仍保留原有的颜色,然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。
细菌芽孢染色原理
材料
菌种:
苏云金芽孢杆菌
蜡样芽孢杆菌
染色剂:
5%孔雀绿水溶液
%番红水溶液
仪器或其他用具:
Eppendorf管
Eppendorf管架
载玻片
显微镜
电磁炉
搪瓷烧杯
方法
Schaeffer-Fulton氏染色法(P78)
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
制备菌悬液
染色
涂片固定
脱色
复染
镜检
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
制片
生理盐水
1、滴生理盐水
挑取少量菌苔
与生理盐水混匀
均匀涂布
或电吹风吹干
2、涂片
滴半滴生理
盐水在载玻
片中央
3、干燥
室温自然晾干
脱色
待玻片冷却后,水洗脱色
不要直接冲菌膜