一步法RT—PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法建立及应用.pdf.pdf

青海畜牧兽医杂志年第卷第期总第期
一步法—检测猪繁殖与呼吸
综合征病毒的方法建立及应用
蔡其刚,陆艳,王戈平,马利青
青海省畜牧兽医科学院,西宁,
摘要:根据公布的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒美洲型毒株一序列设计了一对特异
性引物/,扩增片段为,从而建立了检测的一步法—蛤测方法,特异性试验表明,该引物均不
能扩增其它常见的与繁殖障碍有关的病毒基因。敏感性实验表明,该引物可以检测到~。的病毒含量。利用该
方法对青海某猪场中份临床上疑似的组织进行检测,其中份样品呈阳性结果,阳性率为% ,表明
建立的该方法完全可以快速检测组织中的。
关键词:猪繁殖与呼吸综合征;病毒;—;
中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:
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繁殖与呼吸综合征法卜等,本研究旨在建立一步法—技术并检
, 是由动脉炎病毒科、动脉测临床疑似的病死猪,为的快速诊断
炎病毒属的引起的一种外来性传染病,该病主和试剂盒的开发奠定基础,并为其生产实际应用提供
要以母猪的发热、厌食、流产、死产、木乃伊胎、弱仔等一定的科学依据。
繁殖性障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特材料与方法
征⋯。其特征性病理变化为间质性肺炎,皮肤发绀。.材料
年该病首次报道于美国,随后迅速蔓延北美、.. 临床送检样品份临床送检样品为青海某
欧洲及亚洲各国。我国于年初首次从国内疑似猪场送检的流产胎儿和有呼吸症状疑似的猪
感染猪群中检出抗体,并分离出只,剖检并取各猪只的肺脏、脾脏、淋巴结,置一℃保
,从而证实了中国内地存在本病的流行和传存待检。
播。由于具有抗原漂移和变异的特性,并.. 参考毒株猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪瘟
且它的主要靶细胞是具有重要免疫作用的肺泡巨噬细病毒、一株,由中国农业科学院兰州兽
胞,因此的感染除引起妊娠母猪及哺‘医研究所保存并提供。
乳仔猪严重发病导致死亡外,患病猪群还会因免疫抑.. 试剂小量病毒/液体样品总/抽提
制造成继发感染,尤其是呼吸道病原的感染,加剧病纯化试剂盒、、
情,使死亡率增高,给养猪业造成严重的经济损失。而等均购自大连宝生物公司。
且本病与其它引起猪繁殖障碍的疾病存在着非常类似. 方法
的临诊症状,根据现场诊断很难做出准确鉴别。目前, .. 病料组织总的提取纯化取少量肺脏、
感染已引起国内外广泛关注,但由于尚无较为脾脏、淋巴结等组织混在一起,于无菌研钵中彻底研,
理想的防治措施,因而的检疫和检测方法的研磨,然后加人裂解液,再研磨混匀,静置后
究显得尤为重要,,/
断方法。如常规检测方法及分子生物学检测方离心后,取上清,按照小量病毒/液体样品总
收稿日期:—
通讯作者:马利青~,男,研究员,—:..
. 青海畜牧兽医杂志卷期
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/抽提纯化试剂盒操作制备组织总。—扩增,结果株稀释的
.. 引物设计根据公布的已知美洲株病毒液仍能检出特异性条带,说明—扩增可以
序列序列号:~。的病毒含量见图。
计一对引物,所设计引物位于蛋白