下载此文档

MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法.docx


文档分类:行业资料 | 页数:约13页 举报非法文档有奖
1/13
下载提示
  • 1.该资料是网友上传的,本站提供全文预览,预览什么样,下载就什么样。
  • 2.下载该文档所得收入归上传者、原创者。
  • 3.下载的文档,不会出现我们的网址水印。
1/13 下载此文档
文档列表 文档介绍
该【MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法 】是由【guoxiachuanyue015】上传分享,文档一共【13】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验
MM_FS_CNJ_0335
出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法
适用范围本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。其他食品可参照使用。
样品制备及增菌培养
.肉类
如为冷冻产品,应在45°C以下不超过15min,或在2〜5°C不超过18h解冻。若不能及时检验,应置于一15°C左右保存。非冷冻而易腐的食品,置于4°C冰箱保存。
以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25g,置于灭菌均质杯内,加入25mL缓冲胨水增菌液,以8000〜lOOOOr/min均质lmin,移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至土,于37C水浴培养4h(以增菌液达到37C时算起),进行前增菌;其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于42±1°C培养20±2h,进行选择性增菌。必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。其后,移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至土,于37C培养24±2h,进行直接选择性增菌。
.蛋品冰蛋品(冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄)
.按解冻和保存样品。
.以无菌操作称取样品25g,置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀,如pH低于,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至土,于37C培养24±2h,进行直接选择性增菌。
干蛋品(鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉)
以无菌操作将样品碾碎后,称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内(瓶内事先盛有直径3〜4mm的玻璃珠约50粒),振荡10min,如pH低于,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至土,于37C培养20〜24h,进行前增菌;其后,移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL玻璃瓶内,混匀,于42±1C培养20±2h,进行选择性增菌。
分离培养
•将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用),于37C培养24±2h。
•观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。
沙门氏菌属的菌落特征见表1。

琼脂平板
菌落特征
沙门氏菌
亚利桑那菌
亚硫酸铋琼脂
棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色,有些菌株呈灰绿色,周围培养基不变或微变暗
黑色,周围培养基一般不变黑或微变黑,有些菌株呈灰绿色,带黑心或不带黑心
胆硫乳琼脂
无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色,有些菌株无色半透明
乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌落,乳糖阳性菌株为粉红色有暗色中心
亚利桑那菌琼脂
黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物
粉红色有黑色中心,有时为全黑色,周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇或蔗糖的细菌包围时,菌落边缘可为浅黄色
鉴定
.筛选试验
每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37°C培养24±2h。
挑取菌落后的琼脂平板,应置于4〜8°C至少保留24h,以备必要时复查。按表2或表3结果进行判断。

三糖铁琼脂
赖氨酸脱羧酶培养基
初步判断
斜面
底层
产气
硫化氢
K
A
+(—)
+(—)
+
可疑沙门氏菌属
K
A
+(—)
+(—)

可疑沙门氏菌属
A
A
+(—)
+(—)
+
可疑亚利桑那菌
A
A
+(—)
+(—)

非沙门氏菌属
K
K
+/—
+/—
+/—
非沙门氏菌属
注:K—产碱;—阳性反应;(一)一少见反应;A—产酸,性反应;+/日性或阴性反应。

三糖铁琼脂
尿素酶琼脂
初步判断
斜面
底层
产气
硫化氢
K
A
+(—)
+(—)

可疑沙门氏菌属
A
A
+(—)
+(—)

可疑亚利桑那菌
K
A
+(—)
+(—)
+
非沙门氏菌属
A
A
+(—)
+(—)
+
非沙门氏菌属
K
K
+/—
+/—
+/—
非沙门氏菌属
注:K—产碱;—阳性反应;(一)一少见反应;A—产酸;一阴性反应;+/阳性或阴性反应。.生化试验将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验(表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见结果,不再另做)。

序号
生化项目
反应
沙门氏菌
亚利桑那菌
1
尿素酶试验


2
V—P试验


3
***化钾试验


4
赖氨酸脱羧酶试验
+
+
5
吲哚试验


6
丙二酸钠试验

+
7
卫矛醇试验
d

注:—阳性反应;阴性反应;d—反应不定。
所有生化试验管均于37°C培养24±2h。
生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按进行。.血清学试验
检查培养物有无自凝性
在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性的混蚀悬液,将玻片轻轻摇动30〜60s,在黑色背景下观察反应(最好用放大镜观察)。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,即认为有自凝性。反之无自凝性。
检查“O”抗原
对无自凝性的培养物,按照的程度进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水,在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果,必要时,可结合结果按进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验。
检查“Vi”抗原
按照的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。
.根据和试验结果,按照表5进行判定。
类别
生化试验
血清学试验
其他试验
判定
1
符合表4中沙门氏菌生化特性
“0”因子血清分群阳性
沙门氏菌
2
符合表4中沙门氏菌生化特性
“0”因子血清分群阴性
菌落典型,镜检革蓝氏阴性无
芽胞杆菌
沙门氏菌
3
尿素酶试验阳性
非沙门氏菌
4
尿素酶试验阴性,表4生化反应3〜5项中任一项不符合沙门氏菌特性
“0”因子血清分群阳性
沙门氏菌
5
尿素酶试验阴性,表4生化反应2〜5项中任一项不符合沙门氏菌特性
“0”因子血清分群阴性
非沙门氏菌
6
尿素酶试验阴性,表4生化反应2〜5项中任二项或二项以上不符合沙门氏菌特性
非沙门氏菌
7
符合表4中亚利桑那菌生化特性
“0”因子血清分群阳性
亚利桑那菌
8
符合表4中亚利桑那菌生化特性
“0”因子血清分群阴性
菌落典型,镜检革蓝氏阴性无
芽胞杆菌
亚利桑那菌
9
尿素酶试验阳性
非亚利桑那菌
10
尿素酶试验阴性,〜5项中任一项不符合亚利桑那菌特性
“0”因子血清分群阳性
亚利桑那菌
11
尿素酶试验阴性,〜5项中任一项不符合亚利桑那菌特性
“0”因子血清分群阴性
非亚利桑那菌
12
尿素酶试验阴性,表4生化反应2〜5项中任两项或两项以上不符合亚利桑那菌特性
非亚利桑那菌
注:1丙二酸钠试验阴性,卫矛醇试验反应不定的菌株,按上述1〜6类别结果进行判断。
2丙二酸钠试验阳性,卫矛醇试验阴性的菌株,按上述7〜12类别结果进行判断。
3如以上生化项目仍不能判定时,可按P・R•爱德华,W・H•爱文:《肠杆菌科的鉴定》(1978中译
本),扩大必要的生化试验。结合血清学作综合判定。
报告结果
.报告阳性结果:“发现沙门氏菌”或“发现亚利桑那菌”或“发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
.报告阴性结果:“未发现沙门氏菌”或“未发现亚利桑那菌”或“未发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
培养基
.营养肉汤(NB)
蛋白胨
酵母膏
***化钠
葡萄糖
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至土,分装试管(12mmX100mm),每管约3mL高压灭菌121°C,15min。
.营养琼脂(NA)
蛋白胨
酵母膏
***化钠
葡萄糖

蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至土,分装试管(12mmX100mm),每管约3mL,高压灭菌121C,15min。•缓冲胨水增菌液(BP)
蛋白胨
***化钠
磷酸氢二钠(含12个结晶水)磷酸二氢钾
蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土高压灭菌121°C,15min,临用时,以无菌操作分装灭菌玻璃瓶,每瓶200mL或225mL。
.亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
蛋白胨
乳糖
磷酸氢二钠(含12个结晶水)
亚硒酸氢钠
L-胱氨酸
蒸馏水
除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约lOmin,加热煮沸5min至完全溶解,冷至55C以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和lg/1L-胱氨酸溶液胱氨酸溶液1OmL(称取胱氨酸,加1mol/L氢氧化钠溶液15mL,使溶解,再加灭菌蒸馏水至100mL即成,如为DL-胱氨酸,用量应加倍)。摇匀,调至土,以无菌操作分装灭菌玻璃瓶内,每瓶100mL或200mL。.四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)
基础液
蛋白胨
牛肉膏
***化钠
碳酸钙
蒸馏水
除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,再加入碳酸钙,调至土高压灭菌121C,20min。硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(含5个结晶水)
蒸馏水加至
高压灭菌121C,2Omin。
碘溶液
碘片
碘化钾
蒸馏水加至
将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中,再投入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解为止,然后加蒸馏水至规定的总量,贮存于褐色瓶内,塞紧瓶盖备用。煌绿水溶液

蒸馏水
溶解后,存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。牛胆盐溶液
牛胆盐
蒸馏水加热煮沸至完全溶解,高压灭菌121C,2Omin。
制备
基础液
硫代硫酸钠溶液
碘溶液
煌绿水溶液牛胆盐溶液
临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。最后分装于灭菌玻璃瓶内,每瓶100mL或225mL。•亚硫酸铋琼脂(BS)
蛋白胨
牛肉膏
葡萄糖
硫酸亚铁
磷酸氢二钠
煌绿或5g/L水溶液5mL
柠檬酸铋铵
亚硫酸钠
琼脂
蒸馏水
将前三种成分加入300mL蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL蒸馏水中,琼脂加入600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,静置约30min,加热煮沸至完全溶解。冷至80°C左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调至±,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50〜55C。加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿,每皿约20mL。
本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,新配制的培养基呈玉白色不透明,贮于室温暗处,超过48h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。
•胆硫乳琼脂(胆盐•硫化氢•)
蛋白胨
牛肉膏
乳糖
蔗糖
牛胆盐
硫代硫酸钠
柠檬酸钠
柠檬酸铁铵
中性红或5g/L水溶液6mL

蒸馏水
除中性红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至土。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解。将两种溶液混合后,再加入5g/L中性红水溶液6mL,搅拌均匀,冷至50〜55C,倾注平皿,每皿约20mL。本培养基不需高压灭菌,也不再进行任何加热。制成的平板为橙黄色。
•亚利桑那菌琼脂(SA)
蛋白胨
酵母膏
牛胆盐
蔗糖丙二酸钠卫矛醇葡萄糖***化钠硫代硫酸钠柠檬酸铁铵
酚红或5g/L溶液8mL
琼脂
蒸馏水
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,加热煮沸至完全溶解,调至±。
将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,冷至约90°C,将上述溶液加入琼脂中,摇匀,再加入酚红指示剂,混匀,冷至50〜55C,倾注平皿,每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌,制成的平板为透明桔红色。
•三糖铁琼脂(TSI)
蛋白胨
牛肉膏
乳糖
蔗糖
葡萄糖
硫酸亚铁铵(含6个结晶水)
酚红或5g/L溶液5mL
***化钠硫代硫酸钠琼脂
蒸馏水
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mmX100mm),每管约2〜4mL,高压灭菌121C10min或115C15min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
•赖氨酸脱羧酶培养基(LD)
酵母膏
葡萄糖
L-赖氨酸
溴甲酚紫或8g/L溶液2mL
蒸馏水
除溴甲酚紫外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土,加入溴甲酚紫,混匀,分装试管(12mmX100mm),每管1〜,高压灭菌121°C,15min。
试验与判断:接种待试菌,于37C培养24±2h。阳性反应为紫色,阴性为黄色。
•尿素酶琼脂(U)
蛋白胨
葡萄糖
尿素
***化钠
磷酸二氢钾
酚红或5g/L溶液
琼脂
蒸馏水
除酚红和尿素外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至pH7±,高压灭菌121C,15min,冷至50〜55.,以无菌操作加入尿素20g(400g/L已经除菌过滤的尿素溶液50mL)和5g/L酚红溶液,混匀,分装灭菌试管(
12mmX100mm),每管2〜3mL,置成斜面。
试验与判断:大量接种待试菌于37C培养24±2h,强阳性反应为深红色,弱阳性为粉红色,阴性为黄色或不变色。
半固体琼脂(VP)
制备
蛋白胨
酵母膏
葡萄糖
***化钠

蒸馏水
将各成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土,分装试管(12mmX100mm),每管1〜,高压灭菌121C,lOmin,灭菌后立即取出冷却备用。
试验判断
.配制试剂
甲液:
a-萘酚
无水乙醇溶液
乙液:
氢氧化钾肌酸蒸馏水
先将氢氧化钾溶于水中,再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4C冰箱内,可使用2个月。
.试验
接种幼嫩待试菌,于37C培养24±2h,将甲液(约6滴)加入试管中,摇混均匀,再加乙液(约3滴),再摇混均匀。
.判断
阳性反应立即或在15min内呈现红色,阴性为铜色。阴性结果在lh后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失,此仍作阳性反应。
•吲哚培养基(1):
制备
蛋白胨
***化钠
DL-色氨酸
蒸馏水1000mL
除DL-色氨酸外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin。另将DL-色氨酸加入约4mLlmol/L氢氧化钠溶液中,待溶解后,再将两液进行混合并加热煮沸至完全溶解,调至土,分装试管(12mmX100mm),每管1〜,高压灭菌121°C,15min。
试验与判断
•配制试剂
柯凡克试剂:
对二甲氨基苯甲醛
戊醇
浓盐酸
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中,缓慢搅拌加入盐酸,加热至
60C,呈深黄色,静置6〜7h,变成黄色即可使用。试液宜小量配制,不用时保存于4C冰箱内。久存后试液变成褐色不可使用。
•试验
接种待试菌,于37C培养24±2h,滴加柯凡克试剂。
•判断
阳性反应出现红色环;阴性为黄棕色环。
•***化钾培养基(KCN)制备
蛋白胨
***化钠
磷酸二氢钾
磷酸氢二钠
***钾(无亚***盐)
5g/L***化钾溶液
蒸馏水
将蛋白胨、***化钠和***钾加入900mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土,高压灭菌121C,15min,取出置于4C冰箱内进行冷却。
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶于1OOmL蒸馏水,高压灭菌121C,15min,取出进行冷却。
在冷却后的上述培养液900mL中,以无菌操作加入磷酸缓冲液lOOmL和5g/L***化钾溶液(必须用冷却的灭菌蒸馏水配制)10mL,摇混均匀(***化钾的最终浓度为/L)。并立即分装灭菌试管(12mmX100mm),每管约1〜,同时加入约灭菌石蜡油封盖。在4°C冰箱中可保存7d。
试验与判断
.配制试剂
甲液:
氨基苯磺酸
5mol/L乙酸
乙液:
a-萘***
5mol/L乙酸
.试验在三糖铁琼脂斜面上挑取少量菌苔,先接种于吲哚培养基中,混匀(使其浓
度近似于37C,24h肉汤培养物)然后烧灼接种环,再沾取吲哚培养基少许接种于***化钾培养基中,于37C培养24±2h。培养之后,先观察培养液有无混浊,然后在每支***化钾培养物试管内滴加甲液1滴,然后再滴加乙液1滴,摇匀。
.判断
强阳性反应为鲜红色,弱阳性为粉红色,在30〜60min内,强阳性可转为暗褐色。阴性无变化(加试剂前,培养液出现混浊,即有细菌生长,亦为阳性反应)。.丙二酸钠培养基(M)
酵母膏
硫酸铵
磷酸氢二钾
磷酸二氢钾
***化钠
丙二酸钠
葡萄糖
溴麝香草酚蓝或5g/L溶液5mL
蒸馏水
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至土,加入溴麝香草酚蓝,再混匀,分装试管(12mmX100mm),每管1〜,高压灭菌115C,lOmin。
试验与判断:接种大量幼嫩待试菌,于37C培养24±2h,阳性反应为普蓝色;阴性不变色。
.卫矛醇半固体琼脂(D)
蛋白胨
酵母膏
卫矛醇
***化钠
磷酸氢二钾
溴麝香草酚蓝或8g/L溶液10mL

除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约lOmin,加热煮沸至完全溶解,调至±,加入溴麝香草酚蓝,呈绿色,分装试管(12mmX100mm),每管约1〜,高压灭菌121C,15min,灭菌后立即取出,冷却备用。

MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.

相关文档 更多>>
非法内容举报中心
文档信息
最近更新