LC液相色谱原理与应用培训课件.pptx

液相色谱原理与应用
色谱法分类(按流动相种类)
色谱类型流动相主要分析对象
气相色谱气体挥发性有机物
液相色谱(LC) 液体可溶性物质
超临界流体色谱超临界流体各种有机化合物
电色谱缓冲液、电场离子,各种有机物
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC )
高压液相色谱( high pressure LC, HPLC)
高速液相色谱( high speed LC, HSLC)
高分辨液相色谱( high resolution LC, HRLC)
讲课主要内容



(IC)


样品:植物的石油醚提取液
碳酸钙:固定相
石油醚:流动相
石油醚
(流动相)

1903年,俄国植物学家Tsweet为了分离植物色素发明了色谱技术。(吸附色谱)
Chromatography(层析法、色层法)
Michael Tswett
(1872-1919)
色谱法的发展历史
年代
发明者
发明的色谱方法或重要应用
1906
Tswett
用碳酸钙作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念。
1931
Kuhn, Lederer
用氧化铝和碳酸钙分离α-、β-和γ-胡萝卜素。
1938
Izmailov, Shraiber
最先使用薄层色谱法。
1938
Taylor, Uray
用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。
1941
Martin, Synge
提出色谱塔板理论;发明液-液分配色谱;预言了气体可作为流动相。
1944
Consden等
发明了纸色谱。
1949
Macllean
在氧化铝中加入淀粉黏合剂制作薄层板使薄层色谱进入实用阶段。
1952
Martin, James
从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。
1956
Van Deemter等
提出色谱速率理论,并应用于气相色谱。
1958
Golay
发明毛细管柱气相色谱。
1959
Porath, Flodin
发表凝胶过滤色谱的报告。
1964
Moore
发明凝胶渗透色谱。
1965
Giddings
发展了色谱理论,为色谱学的发展奠定了理论基础。
1975
Small
发明了采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。
1981
Jorgenson等
创立了毛细管电泳法。
色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作
年代
获奖学科
获奖研究工作
1937
化学
类胡萝卜素化学,维生素A和B
1938
化学
类胡萝卜素化学
1939
化学
聚甲烯和高萜烯化学
1950
生理学、医学
性激素化学及其分离、肾皮素化学及其分离
1951
化学
超铀元素的发现
1955
化学
脑下腺激素的研究和第一次合成聚肽激素
1958
化学
胰岛素的结构
1961
化学
光合作用时发生的化学反应的确认
1970
生理学、医学
关于神经元触处迁移物质的研究
1970
化学
糖核苷酸的发现及其在生物合成碳水化合物中的作用
1972
化学
核糖核酸化学酶结构的研究
1972
生理学、医学
抗体结构的研究
HPLC按用途分类
分析型LC(实验室用)
制备型LC(高压、小规模)
(常用低压和中压制备LC)
制备色谱是分析型色谱的放大;
(原则上)所有分离模式都可用于制备色谱。
按仪器构成或关键部件大小分类
常规HPLC
微柱、半微柱HPLC
微纳HPLC(毛细管HPLC)
便携式HPLC
微型HPLC、芯片HPLC
超高压液相色谱(UPLC)
多维(二维)液相色谱
HPLC按分离机理分类
吸附色谱
分配色谱(正相和反相)
凝胶色谱(渗透和过滤、高温和低温)
离子色谱(交换、排斥、离子对)
亲和色谱
手性色谱
亲水作用色谱
疏水作用色谱
分子印迹HPLC
样品带的移动方式
洗脱法前沿法置换法
洗脱法:
最方便的色谱操作方式;分析型色谱普遍采用此法。
一次性上样,流动相连续通过固定相,样品中的组分依次被洗脱流出色谱柱。
流动相和固定相通常处于平衡状态。组分因在两相中的平衡分配系数(与固定相的作用力)不同,在固定相中停留的时间不同,最终按与固定相作用力从小到大的顺序依次分开。