内毒素实验凝胶法.ppt

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内容
基本概念
实验方法
操作注意事项
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细菌内***
细菌内***是革兰氏阴性菌细胞壁的产物,它主要化学成分是脂多糖。细菌在生活状态下不会释放出来,只有当细菌死亡后才会表现出毒性。
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一、概念及相关知识
热原反应:病人在静脉给药15分钟后发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、昏迷、休克等症状。
热原:任何可以导致肌体发热的物质。
机理:外源性热原质通过内源性热原质起作用。
外源性
热原质
吞噬性
白细胞
内源性
热原质
体温调节
中心
发热
新蛋白合成
新mRNA翻译
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1942年,美国药典首次收载热原检查法,中国药典自第一版(1953年版)起收载。
所有注射用药品(肌肉注射、静脉注射)都要经过热原检查。
热原检查法的局限性:
1、重现性差。
2、对药物引起的增加、抑制作用无法控制。
3、不同细菌产生的热原质的致热域有差别。
4、非定量反应。
虽然不排除有其他热原物质存在,但细菌内***是最主要的热原物质。
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细胞壁结构:
肽聚糖脂蛋白
革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌外膜
磷壁酸脂多糖
细菌内***:革兰氏阴性细菌细胞壁外膜中的脂多糖(LPS)。当细胞壁外膜结构完整时不具备生物活性,只有当细菌死亡,脂多糖脱落才显示出内***活性。
脂多糖结构:多糖O抗原+核心多糖+类脂A
致热活性部分
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细菌内***的生物活性
1、致热性。2、致死性毒性。3、白细胞减少。4、激活凝血系统。5、降低血压,休克。6、Shwartzman反应。7、刺激淋巴细胞有丝分裂,等等。
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细菌内***的耐热性
细菌内***具很强的耐热性,一般的高压灭菌不能去除细菌内***,需250℃至少30分钟以上的干热灭菌才能使其灭活。
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实验用器具的处理
内***试验中使用的器皿都要经过处理去除可能存在的外源性内***。
耐高温的玻璃器皿等置于电热干烤箱内180℃干烤至少2h或者250℃干烤至少30分钟;
塑料器皿置于30%双氧水中浸泡4h,再用细菌内***检查用水充分冲洗,60℃烘干备用。
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细菌内***的单位
内***的量值:
1、内***单位(EU)
1982年FDA将当时美国代号为EC-2的内***标准品规定为5EU/ng。1983年内***单位(EU)被USP正式引用。
2、国际单位(IU)
WHO先后两次组织协作标定,建立内***国际标准品,其中第二批内***国际标准品适用于所有内***检查法,且明确1IU=1EU。
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